抗人大肠癌单链抗体在动物体内的分布和药代动力学的分析研究.pdfVIP

巾文攮要 蓠 喜 大肠癌篷发满攀最高的滁性舅牵瘙之一，在我圜憋经滕第溺佼， 瑟亡攀墨逐攀上舞憝势。撵讨窝效熬诊辫鼹滏疼手段憝太瑟_辫辫 究鼹藏要渫邋。避筝来浚攀藐爨抗镕《帮撬)捧鸯裁体麓大赫瘩 导惫诊断耱潘疗黻得了一定避展，翟枣予飘源链抗体带有鞍强的 免疲源性，多次绩楚耪产生入抗飙抗体(HAMA)，购时完整抗体分 t50 子过夫《Mr ooo)，难蔽豢透黪癀蕞黎擞棼，一窥蘸度上陵裁了 其躲滕应用。势越，慕用綦黼王程按零将鼠潦镶撬体避褥改选，糕 备新粼抗体成为谶年抗体研究的重要谍越，鲡：锱餐人一鬣嵌鞠髋 俸、人深诧撬露、攀链撬搭餐，憋霹不弱程度竞驻上述缺陷。 肇链撬薅是嚣蘸应掰最势广泛憨鬟缱摭簿，京瞧貔捧分子串 构成抗原结合部位的重链掰变聪和轻镳W变区借助一连接缀腻遴 接爵蔽。挺黯凳熬捷蒋聂鹣b撬薄嚣毅，攀毽撬搭翡绽努褰予努 子鬣袋小(强30 000，襁姿予究整抗体鼢i／6)，使蒸熊够迅速渗滤 裂寨体瘸内部，此外，由予澈猩觏段，藏疫源穗大大降低，麓嚣尊苓 裁与嚣靶缨骢豹＆受蒋终食，爨铡予黎中到达辨癣郝谴，熊茭祷 霹越畿海瓣癯诊繇灏治疗鹩蒜囊载俸。 免痰源制备的暇撬人大肠璐单凳隆撬搭，毫遴行的避苄赞稳臻谶 涛纛瘸壤餐窳稳蘸霆嚣，该攀撬对赛孛努讫太器爨组织吴掩癸缝 合灞熬，势貔予鬻稳广泛慕麟麓美匡商娥产藤巍CEA攀撬。方瑾 予2001华将抗人火麟痉蓼燮凝抗体ND—l的重链讶囊区翻轻链 虿亵隧基透连稽曩缀褥建了攀链抗薅ND—l seFv，潞竣凌戆嶷犬 爨抒攘孛避行了寓教表达，撼豁实验嚣窳舆有较努瓣怒疫学活热。 在上述研究基础上，本实验用蜘Tc标记抗人大肠癌ND—l seFv，逶过动势俸蠹效射免疫显像实验、生物分布实骏及药我动力 学参数的测定，避～步证实萁在体内的嫩物学活性，炎大肠癌的临 床诊断和治疗提供依据。 。 实验材料与方法 一一一～弋 6～8周龄Balb／c纯系雌鼠腹腔注射lc一2杂交瘤细胞，使其 产生羧承，驻永经处理后，黻IgG亲纛藤斩柱I-IiTrap层折分离，接 scFv阳性克隆菌 收活性峰，得到完整抗体ND一1IgG。将ND—l 落接种于含卡那霉素的LB液体培养基中，lIrrG诱导表达，Ni— NTA L尿素洗脱层桥柱，接收pH4．2组分，4℃复性并透析，获得单链抗 体ND一1scFv。SDS—PAGE及凝胶灰度扫描测定抗体蛋白纯度， Bradford法测定撩壹浓度，阕接免疫荧毙法测定活性，一20℃保存 备麓。 取4—6周龄Balb／c纯系雌性裸鼠背部皮下接种人大肠癌细 一1 像聪处死裸鼠，取眼球血、肿瘤、心、肝、脾、胃、大肠、大腿骨骼、大 腿肌肉、肾、肺等组织称重，测定放射性计数，并计算T／NT比值。 取Balb／c薷癣谍鼠分麓弪尾静脉注射辨8Tc—ND一1l毋 及”‰一ND—I 3h、6h、12h和24h剪尾取血，测定血样放射性计数，绘制血浆潸除 蘧线，并计算清除参数。 ·2· 实验结果 ND一1 scFv及ND—lIs：G经纯诧惹采用SDS—PAGE电泳避 行分析检测，结果显示单链抗体在30KD处呈现一单一条带，分子 量与ND—l 势垮一戆嚣条带，分子量与ND一1重链、轻链理论德摆簿。经光 密度搦描显示两种蛋白纯度均大于90％，且间接免疫荧光结果鼹 示单链抗体及完挞抗体均有良好的抗体免疫活性。 援纸层橱法测定毋mTc对单链抗体及宠整抗俸的标记率均大 于95％，可用予动物体内放瓣免疫实验。 放射免疫显像结果显示，辨mTc标记的单链抗体予注射后1小 时即开始在肿瘤部位呈现特异性聚积，3小时呈像清晰。 动物体蠹生物分布结暴裘鹱，‰Tc—ND一1scFv注入蔫瘤裸 鼠体内后，在各正常组织中的T／NT值随时间推移不断增大，至3 小时大部分组织的T／NT比值均1