Sorafenib对肝癌侵袭转移潜能的影响和其干预—实验研究.pdfVIP

博士论文 第1页 预一实验研究 中文摘要 手术切除是原发性肝癌最有效的治疗方法，但即使根治术后5年转移复发率仍高 达60．70％。对不能切除的肝癌和肝癌术后转移复发的预防，抗血管生成是一条可探 索的途径，但新近的报道，抗血管生成也可促进转移。分子靶向药物sorafenib是目 前唯一经III期临床试验证实提高晚期肝癌病人生存期的药物，但仅延长3个月生存 期；在东方晚期肝癌病人的III期临床试验中，sorafenib虽延长生存期，但仅推迟肿 瘤进展。作为包括抗血管生成作用的somfenib是否也有促进癌转移的作用，也是需 要弄清的问题。 本文用不同转移潜能的人肝癌裸鼠模型，研究sorafenib治疗过程中肿瘤进展的 原因，以及对肿瘤侵袭转移潜能的影响。鉴于肿瘤转移与肿瘤细胞及其所处微环境 有关，在肝癌中也发现微环境中的炎症因子、巨噬细胞可预测肝癌患者术后复发转 移。为此，本文拟从肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞两个方面进行研究，并探索进一 步提高sorafenib疗效的途径。 1．低剂量sorafenib诱导肝癌侵袭转移潜能增强 本部分工作的主要目的是在不同转移潜能的人肝癌裸鼠模型中，探索不同剂量 并延长荷瘤鼠生存期。Sorafenib虽抑制肺转移灶数量，但并未降低肺转移率；而考 虑至lJsorafenib治疗组肿瘤体积更小，以标化肺转移率(肺转移灶数目／肿瘤体积)计 (100mg／kg)组在用药期间未观察到促转移，但治疗一周后停药，总体生存更差， 第2页 博士论文 在对照组小鼠全部死亡之前，大剂量组小鼠都已死亡。 促进肝内播散，且不降低LM3模型腹腔转移率和肺转移率。通过流式细胞仪检测外 tumor 周血肿瘤细胞(circulating 显促进CTC增多。 2．乏氧导致上皮．间质转化是sorafenib促侵袭转移的重要机理 inducible 我们通过免疫组化染色内源性乏氧标记物乏氧诱导因子(hypoxia 组肿瘤组织明显乏氧。乏氧可通过诱导上皮．间质转化(EMT)促进侵袭转移，因此 Vimentin，提示sorafenib治疗后肿瘤发生上皮一间质转化，且侵袭性增强。 3．Sorafenib治疗下调HTATIP2等抑癌基因导致凋亡逃脱是重要分子基础 我们发现sorafenib治疗后残余肿瘤对凋亡发生抵抗，“肿瘤信号通路发现者PCR 亡基因肿瘤坏死因子(n吓)均下调，这些下调的基因均为促凋亡基因，且多数与 P53有关。逃脱凋亡是恶性肿瘤细胞的6大特征之一，诱导或促进凋亡可抑制肿瘤细 FAS、HTATIP2、P53、TNF等的下调，导致肿瘤逃脱凋亡。 4．阿司匹林上调HTATIP2等，抑制sorafenib的促侵袭转移作用 剂。研究结果表明，合用aspirin后显著抑制肿瘤生长、转移，肝内播散灶消失，生 博士论文 第3页 但对P53-mRNA无影响。蛋白水平检测证实aspirin上调HTATIP2蛋白。 多可能主要通过HTATIP2发挥作用。为此选择慢病毒下调的方法，得到慢病毒稳定 提示局部侵袭性更强，LM3-LV—shHTATIP2 LM3．LV．sll}ITATIP2肿瘤中也较LM3．LV．shNon月9瘤中更弱。 5．体外用aspirin与sorafenib合用观察促凋亡作用 体外实验以sorafenib 50M明显下调 HTATIP2．mRNA；选择aspirin 0．1mM／0．5 mM均明 LM3．LV．shNonT阿ILM3．叭，选择不同时间点