TOB1对人类肺癌细胞增殖、转移及放射敏感性的影响及机制的研究.pdfVIP

TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 摘 要 摘 要 目的：本课题通过建立TOB1 稳定高表达及表达抑制的肺癌细胞株，研究TOB1 在体外对肺癌细胞增殖、转移、侵袭及放射敏感性的影响，并初步探讨其相关机 制。 方法：采用RT-PCR 和Western blot 法检测人类正常支气管上皮细胞HBE 和八 种肺癌细胞株中TOB1 表达水平的差异，通过脂质体介导的重组质粒转染及G418 筛选，建立 TOB1 稳定转染株，同时采用 RNA 干扰法抑制 TOB1 的表达；应用 MTT 实验、流式细胞术、体外划痕及Transwell 实验研究TOB1 对肺癌细胞95-D 和A549 增殖、细胞周期分布以及转移侵袭的影响。采用Western blot 和明胶酶谱 实验检测 TOB1 对肺癌细胞中细胞周期和转移侵袭相关蛋白的表达及基质金属蛋 白酶家族(MMPs)活性的影响。采用克隆形成实验、流式细胞术、免疫荧光实验检 测TOB1 对肺癌细胞电离辐射后克隆形成能力、细胞周期分布及γ-H2AX foci 形成 数目的影响，同时应用Western blot 实验检测TOB1 对肺癌细胞电离辐射后细胞周 期及DNA 损伤修复相关蛋白表达的调控。采用免疫共沉淀及Western blot 法初步 探讨其相关机制。 结果：成功构建TOB1 高表达的95-D 和NCI-H1975 细胞稳定株，发现TOB1 高表达显著抑制95-D 细胞的增殖、转移及侵袭能力，并引起95-D 细胞发生明显 的G1 期阻滞。Western blot 及明胶酶谱实验发现TOB1 高表达下调95-D 细胞中周 期相关Cyclin D1、Cyclin B1、Cyclin E 以及α-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2 、 MMP9 等转移侵袭相关蛋白的表达，同时抑制 MMP2 、MMP9 的活性。TOB1 高 表达显著降低 NCI-H1975 细胞的克隆形成能力，降低电离辐射引起的肺癌细胞 G2/M 期阻滞，增加电离辐射引起的γ-H2AX foci 的数目。Western blot 结果显示 TOB1 高表达降低DNA-PKcs 、Ku70 、Ku80 、XRCC4 的表达。利用siRNA 抑制肺 癌A549 细胞中TOB1 的表达在增殖、转移及放射敏感性方面与TOB1 高表达均呈 现相反的表现。免疫共沉淀及Western blot 实验发现TOB1 与PTEN 存在相互结合， 并且TOB1 影响EGFR/MAPK 信号通路的活化。 结论：TOB1 在体外参与对肺癌细胞增殖、转移和侵袭能力的调控，并可以影 I 摘 要 TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 响肺癌细胞的放射敏感性，机制可能与TOB1 通过与 PTEN 存在相互结合，影响 EGFR/MAPK 信号通路的活化有关。 关键词：肺癌；TOB1 ；增殖；转移；侵袭；细胞周期；放射敏感性；DNA 损 伤；PTEN ；EGFR/MAPK 作 者：孙克康 指导老师：焦 旸 副教授 II TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 英文摘要 Studies on the effcets and mechanisms of TOB1 on the proliferation, metastasis and radiosensitivity of lung cancer cells Abstract Aim: To investigate