Toll样受体4在长春瑞滨致静脉内皮损伤中的作用探究.pdfVIP

徐州医学院硕士论文 Toll样受体4在长春瑞滨致静脉内皮损伤中的 作用研究 中文摘要 目的 探讨Toll样受体4(Toll．1ike4，TLR4)在长春瑞滨 receptor (Vinorelbine，VIN)致静脉内皮损伤中的作用。 方法 1．Toll样受体4在长春瑞滨致小鼠静脉炎中的作用研究：取20只 BALB／c小鼠，按随机数字表随机分为2组，每组lO只。实验组按38 mg／kg尾静 脉注射3．2 Saline， g／L长春瑞滨；对照组尾静脉注射相同体积的生理盐水(Normal NS)。于给药后48h颈椎脱臼处死小鼠，并取近心端距穿刺点1cm处鼠尾组织， 4％多聚甲醛中固定后以0．5 tetra．aceticacid， mol／L乙二胺四乙酸(Ethylenediamine EDTA)进行脱钙l周，常规石蜡包埋，切片，苏木素．伊红染色后显微镜下进行 组织学分析；免疫组织化学染色观察TLR4在小鼠尾静脉血管内皮细胞的表达。 2．Toll样受体4在长春瑞滨致人脐静脉内皮细胞损伤中的作用研究：取长势良好 (Humanumbilicalvenous cells，m 的人脐静脉内皮细胞 endothelialMC)，接种于 纤维连接蛋白处理的24孔板或无菌培养瓶-I一，待细胞生长至融合度为90％一95％ 时，加入长春瑞滨终浓度为0．05 h后，PBS mg／L的EGM．2培养基，共同培养1 h、6h、12 洗涤，换入不含药物的新鲜培养基继续培养0 h，以相同培养条件下不 加药物处理的细胞为空白对照。利用荧光定量PCR和WesternBlot的方法检测药 物处理后不同时间点TLR4的mRNA和蛋白表达水平；同时利用免疫荧光检测药 物处理对核因子-KB(Nuclear factor—kappaB，NF-KB)p65核转位的影响。 结果 1．组织病理学：实验组小鼠尾静脉血管出现内皮细胞脱落、血栓形成 和炎细胞浸润等病理学改变，对照组小鼠尾静脉血管无明显损伤表现；免疫组织 化学染色：实验组小鼠尾静脉血管内皮细胞高表达Toll样受体4(0．273± 徐州I医学院硕士论文 0．009)。2．人脐静脉内皮细胞形态学改变：O．05 h后人脐静 mg／L长春瑞滨十预1 脉内皮细胞拉伸，延展，形态不规则，边界不清，排列紊乱，部分细胞悬浮脱落。 h、12 洗去长春瑞滨换入新鲜培养基继续培养6 h后，细胞形态逐渐恢复正常；荧 光定量PCR法检测各组细胞TLR4基因表达水平，结果显示：与空白对照组相 比，各时间点TLR4mRNA表达量均升高，差异有统计学意义(P0．05)，其中 干预1h后升高幅度最大；WesternBlot检测各时间点绌胞TLR4蛋白表达水平，结 果显示：与空白对照组相比，各时间点TLR4蛋白表达量均升高，差异有统计学 核转位情况，结果显示：与空白对照组相比，各时间点NF．KB p65的核转