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葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏保护作用 葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏的保护作用 2011-09-15 江德文　周琳英　林从容　高丽真　吴翊钦 　　葛根素(普乐林)是从中药野葛根的总黄酮提取物中经分离纯化的一种注射剂，大量动物实验及临床研究：葛根素能改善心脏、脑缺血性疾病及其微循环作用［1］；但对脂质过氧化过程和Na+-K+-ATPase活性影响，尚无报道。本实验建立大鼠肾脏急性缺血再灌流模型，观察葛根素对急性缺血再灌流SD大鼠肾脏形态功能和肾脏组织丙二醛(MDA)、Na+-K+-ATPase活性的影响，以探讨葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏功能保护作用及机制。 　　一、材料和方法 　　1.实验动物：雄性SD大鼠共18只，体重(180～200 g)，选用8周龄，由福建医科大学实验动物中心提供，随机分成假手术组，对照组和治疗组。 　　2.模型建立：大鼠经戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后游离双侧肾脏，银夹阻断右肾动、静脉30分钟后放开，观察右肾充血后，再结扎左肾动、静脉，切除左肾。假手术组：游离双侧肾脏，暴露30分钟后再缝合，不作治疗。治疗组：肾缺血前尾静脉注射葛根素(中外合资烟台中策药业有限公司提供，15 mg/kg)，缺血30分钟后再静脉追加相同剂量药物，以后按30 mg/kg的剂量每6小时腹腔注射一次。对照组：用相同的方法注射等体积注射生理盐水，三组大鼠分别于再灌注48小时后处死。 附表　葛根素对肾急性缺血再灌流损伤血Scr，肾组织MDA　　及Na+-K+-ATPase影响 组别 只数 血肌酐 丙二醛 Na+-K+-ATPase (μmol/L) (nmol/mg蛋白) (μmol pi*mg*pr-1/10 min) 假手术组 6 56.12±8.52 4.81±0.52 38.12±3.21 治疗组 6 96.12±5.52▲ 5.02±0.35** 34.03±2.39▲ 对照组 6 186.31±11.63*△ 7.82±0.95*△ 21.38±0.58*△ 　　注：和假手术组比*P0.001，▲P0.05，**P0.05，和治疗组比△P0.01 　　3.肾组织丙二醛(nmol/mg蛋白)含量测定：采用TBA荧光法［2］；肾组织Na+-K+-ATPase(μmol pi*mg-1*pr-1/10 min)活力测定采用哇巴因抑制法［3］。 　　4.电镜检查按常规方法进行。 　　5.统计学处理：实验数据结果用表示，统计采用成组t检验法，差异显著性标准为P＜0.05。 　　二、结果 　　1.血肌酐、肾组织MDA含量和Na+-K+-ATPase活性变化：见附表。 　　2.电镜观察：组织形态学改变。假手术组：细胞膜完整，细胞密度中等，细胞核，线粒体均正常(图1)；对照组：部分细胞密度降低，胞质疏松，线粒体肿胀明显，嵴甚至消失，并可见大量脂褐素聚积(图2，3)。治疗组：细胞病变明显改善，细胞密度恢复正常，多数细胞内线粒体正常，仅个别线粒体仍有轻度肿胀(图4，5)。 　　讨论　上述研究发现，肾缺血30分钟再灌流48小时所致急性肾脏损伤大鼠应用葛根素治疗后，血肌酐、肾组织MDA含量显著下降、Na+-K+-ATPase活性显著升高，线粒体大部分恢复正常，细胞肿胀明显好转，改善了肾脏形态结构和功能。表明葛根素具有保护急性缺血再灌流肾脏损伤作用。目前已知氧自由基(RF)、肾细胞Na+-K+-ATPase损伤在肾脏缺血再灌流损伤中起重要作用［4］。本实验也证实了这一点，对照组血肌酐，肾组织MDA显著升高，而Na+-K+-ATPase活性显著下降，线粒体肿胀，嵴断裂及消失。原因是肾缺血时，肾组织局部肾素-血管紧张素系统，儿茶酚胺增高，造成肾缺血，缺氧加重，线粒体功能受损，肾细胞损伤；当肾血流再通后，局部组织细胞生成大量RF，RF堆积对线粒体功能进一步破坏使肾组织脂质过氧化损伤加重；另一方面线粒体功能受损，使Na+-K+-ATPase供应能量受到影响；Na+-K+-ATPase活性下降，造成细胞内钠离子转运到细胞外发生困难，导致细胞水肿，胞质疏松，又加重了肾细胞损伤。因此，分析葛根素对急性缺血再灌流肾脏损伤保护作用，可能通过(1)具有清除自由基和抗脂质过氧化损伤作用；改善肾细胞Na+-K+-ATPase活性；(2)拮抗肾素-血管紧张素，儿茶酚胺所致收缩微血管作用，改善肾缺血、缺氧［5］。最终改善肾形态结构和肾功能作用，通过本实验研究拓展了葛根素应用范围，为临床上治疗急性缺血灌流肾功能衰竭打下基础，具有临床应用价值。 图1　假手术组：细胞密度中等，细胞核(Nu)，线粒体(Mi)均正常　电镜×12 000 图2　对照组：细胞内见大量脂褐素(↑)及部分线粒体肿胀，嵴消失(△)　电镜×9 000