红尾皇冠鱼aequidensrivulatus病原无乳链球菌的-渔业科学进展.pdfVIP

第36 卷 第2 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.2 2 0 1 5 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus )病原无乳链球菌 的分离、鉴定与特性分析* ① 姚学良 徐晓丽 李贺密 钟文慧 臧 莉 李 灏 杨超敬 (天津市水产技术推广站 天津 300221) 摘要 为查明天津地区养殖红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus)大量死亡的原因，取患病红尾皇冠鱼 进行细菌分离，从病鱼肾脏中分离到优势菌株 071901 ，人工感染试验证实其对红尾皇冠鱼有较强 的致病性；采用形态学观察、生理生化特性、16S rRNA 基因序列系统发育树分析及cfb (GBS-specific gene cfb, CAMP factor)基因检测对菌株071901 进行鉴定。结果显示，菌株071901 为革兰氏阳性球 菌，生化特性与链球菌属的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)相近，基于16S rRNA 基因序列的 系统发育分析将菌株071901 与无乳链球菌聚为一支，以 071901 为模板特异性扩增无乳链球菌的 cfb 基因，也得到了预期的900 bp 的核酸片段，进一步证实菌株071901 为无乳链球菌。对30 种抗 生素的药敏结果显示，菌株071901 对红霉素、阿奇霉素等19 种药物敏感，对多粘霉素、罗红霉素、 呋喃唑酮等11 种药物耐药。 关键词 红尾皇冠鱼；无乳链球菌；生物学特性；16S rRNA；cfb 中图分类号 S96 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)02-0106-07 近年来在国内休闲渔业中，观赏鱼养殖异军突 起，给养殖者带来较大的收益。然而在快速发展的同 1 材料与方法 时，病害问题也日益凸显，造成了巨大的经济损失， 1.1 材料 成为观赏鱼产业健康发展的瓶颈。观赏鱼疾病的发生 患病红尾皇冠鱼取自天津市西青区精武镇养殖 呈现致病因子复杂化、病原多样化、季节性不明显等 园区，体质量为80−100 g。人工感染实验于2012 年 特征。红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus )是我国观赏鱼 10 月进行，健康红尾皇冠鱼购自天津市里自沽农场， 养殖的主要品种之一，2012 年天津地区养殖的红尾 体质量为(90±3) g ，暂养7 d 后用于人工感染实验。饲 皇冠鱼暴发疾病，发病鱼死亡率高达80% ，病鱼体色 养期间采用充气泵增氧，每日投饵两次，吸污 1 次，换 发黑，体表多处出血，逐渐失去平衡，在水中翻滚、 水 1/2，实验期间水温保持在30 ℃。脑心浸液培养基 打转或静止于水底；肠道内无食，积有黄色粘液，与 (Brian Heart Infusion, BHI)购自德国默克公司，细菌 已报道的鱼类链球菌感染相似。 微量生化反应管及细菌药敏纸片等均购自杭州天和 对分离自红尾皇冠鱼中的病原菌进行了理化特