儿茶素对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C和热休克蛋白27变化的影响.pdfVIP

中文摘要 儿茶素对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C及热休克蛋白27变化的影 +晌 摘 要 目的：糖尿病视网膜病变(Diabetic (diabetes 视网膜组织中发生的渗漏性、闭塞性和增殖性的微血管病变，是重要的致 盲性眼病，在糖尿病患者不断增加的今天，加强糖尿病眼病的防治工作已 经成为当务之急。目前关于DR发病机制尚未完全明了，近年来甘油二酯 kinase (diacyl91ycerol，DAG)／蛋白激酶C(proteinC，PKC)信号通路的 激活，在DR发生及发展中的作用日益引起大家的重视。DM状态下，细胞内 增强。激活的PKC的可引起视网膜组织细胞改变、视网膜基底膜增厚、视 网膜组织中血管的渗透性增强以及新生血管形成。热休克蛋白(heat shock 产生，该家族蛋白是重要的分子伴侣，具有多种生物学作用。HSP27是／J、HSP 家族成员之一，正常状态下在细胞内呈低水平表达，当遭遇应激刺激时表 达量增高，以发挥抗氧化损伤的作用。许多植物中存在PKC抑制剂，儿茶素 作为天然植物提取物中药理功能的主要成分，因含酚性羟基而极易发生氧 化、聚合、缩合等变化，具有较好的抗氧化、清除自由基的能力，且安全、 无毒、用量少，并具有抗肿瘤、抗基因突变、抗菌消炎、抗动脉粥样硬化、 抗氧化、降压、降糖等多种生物学功能。已有研究发现儿茶素对视神经具 有保护作用Ⅲ，但对糖尿病视网膜病变的研究尚未见报道。 本实验通过制作大鼠糖尿病模型，观察视网膜组织中PKC、HSP27的改 变并给予全身应用儿茶素进行干预，探讨儿茶素对糖尿病视网膜病变的作 用。 儿茶素治疗组(治疗组)18只(36眼)。对照组和治疗组大鼠制作糖尿病模 型：两组大鼠禁食过夜后，按65mg／kg体重一次性左腹腔内注射链脲菌素 中文摘要 16．7mmol／L，作为糖尿病大鼠模型。三组大鼠均自由进食标准鼠食和水， 治疗组大鼠给予儿茶素200mg／kg(以蒸馏水溶解)灌胃，1次／d：正常组、 对照组给予等量蒸馏水灌胃，1次／d。每周监测血糖、体重。分别于造模 成功后第2w、第4w、第8w取正常组、对照组及治疗组大鼠各6只，以水合氯 醛麻醉，快速取双侧眼球，每只大鼠一眼在解剖显微镜下将大鼠眼球沿赤 道部切开，去除角膜和晶状体，冷生理盐水冲洗玻璃体，用眼科显微镊剥 离视网膜，制作视网膜匀浆以酶联免疫吸附法测定大鼠视网膜组织中PKC 的表达，另一眼迅速投入固定液固定24h，用于免疫组织化学染色观察 进行统计学分析。 ． 结果： 1．各组大鼠各时间点血糖、体重比较： 糖尿病模型诱导成功后在实验的各时间点，对照组、治疗组大鼠血糖 水平均较正常组高，有非常显著性差异(pO．01)，治疗组与对照组大鼠血 糖水平降低，有显著性差异(pO．01)。 实验过程中，糖尿病大鼠体重减轻，治疗组、对照组与正常组相比各 时间点均有显著性差异(第2w pO．05，pO．01；第4w及第8wpO．01)； 1)。 治疗组大鼠体重减轻程度较对照组变小，有统计学意义(pO．O 2．各组大鼠视网膜组织中PKC活性比较： 糖尿病模型诱导成功后，第2w、第4w、第8w：对照组大鼠视网膜组织 中细胞膜PKC活性较正常组显著增高(pO．01)，治疗组大鼠视网膜组织中 第8w治疗组视网膜组织中细胞膜PKC活性明显低于对照组，差异有统计学 意义(pO．01)。 在实验的各时间点，正常组、对照组与治疗组大鼠视网膜细胞浆中PKC 活性差异均无统计学意义(pO．05)。 3．各组大鼠视网膜组织dPHSP27免疫组织化学染色分析： 视网膜组织中HSP27的阳性表达主要位于视网膜神经节细胞和神经纤 中文摘要 维层中，表达阳性的细胞胞浆呈棕黄色，视网膜其余各层中未见明显HSP27 阳性表达。正常组大鼠仅见少量表达