地西他滨对小鼠淋巴瘤细胞免疫原性的增强作用和机制探索.pdfVIP

摘要 摘 要 地西他滨(Decitabine，DAC)作为一种新型去甲基化药物，主要用于骨髓 异常增生综合征(Myelodysplastic Leukemia，AML)的治疗。研究发现DAC可以上调许多免疫相关的分 Myeloid 子，增强肿瘤细胞的免疫原性，在白血病患者的治疗中发现，去甲基化药物可 以诱导产生肿瘤特异性细胞毒性T细胞(CytotoxicLymphoctye，CTL)，人们推 测去甲基化药物具有增强抗肿瘤免疫反应的作用。我们选取小鼠T淋巴瘤／淋巴 细胞白血病细胞EL4，建立小鼠淋巴瘤模型，研究DAC对EL4细胞免疫原性的 增强作用并对其机制进行探索。 1．地西他滨诱导小鼠淋巴瘤细胞EL4凋亡 我们用不同浓度的DAC体外处理EL4细胞，通过CCK．8法检测细胞的增 殖情况，发现DAC对EL4细胞的生长抑制作用具有浓度依赖性，0．259M时， 有30％的增殖抑制作用。此时，细胞形态发生了明显变化，呈现出一种不典型 的凋亡状态，且在体内成瘤性也明显下降。经过Amaexin．V／PI双染后，流式检 测发现DAC浓度越高，细胞凋亡越明显，且以早期凋亡为主。 2．地西他滨上调CD80分子 基因表达谱芯片筛查结果显示，DAC处理后EL4细胞肿瘤相关抗原和CD of 分子(Cluster 显。我们利用PCR技术和流式细胞仪检测，证实DAC上调EL4细胞CD80在 mRNA和蛋白水平的表达，上调状态在体外能够持续30天左右。同时我们发现 动子区甲基化测序，我们发现CD80的表达跟DNA甲基化关系密切。 3． 地西他滨上调OD80强化抗肿瘤免疫反应 在动物实验中，我们发现DAC能够抑制EL4细胞的成瘤性。通过流式细胞 I 摘要 仪检测发现，DAC治疗后肿瘤内T细胞侵润明显增多。胞内细胞因子染色结果 表明：T细胞IL．2和IFN．Y的分泌量也明显增加。利用抗．CD8和抗．CD4单克 隆抗体建立淋巴瘤小鼠CD8+T细胞或CD4+T体内清除模型，发现DAC治疗后 CD8+T参与了抗肿瘤反应。 混合淋巴细胞培养发现DAC处理后的EL4细胞能够有效刺激淋巴细胞增 殖，刺激T细胞分泌IL．2和IFN．Y，当CD80被阻断后，其对淋巴细胞的刺激 细胞群，对小鼠进行接种，发现CD80+组小鼠肿瘤生长明显缓慢，且部分肿瘤 会停止生长并缩小，流式分析结果发现CD80+组肿瘤中T细胞和NK细胞的侵 润都显著高于CD80。组，说明DAC诱导CD80上调，增强肿瘤免疫原性，强化 了抗肿瘤免疫反应。 综上，我们的研究发现DAC可以诱导EL4细胞表达多种免疫相关分子，增 强其免疫原性，其中CD80起重要的作用，并首次发现CD80表达跟DNA甲基 化的关系，丰富了免疫调节受表观调控的内容，为去甲基化药物增强免疫治疗 效果提供了新的理论依据和方法。 关键词：地西他滨，去甲基化，CD80，免疫原性，抗肿瘤免疫反应 Abstract used onekindofnovel agent，1Smainly Decitabine(DAC)，as hypomethylating acute leukemia myeloid thetreatmentof syndrome(MDS)and for myelodysplastic thatDACcan lmmune recentstudies many been up’regulate