复发缓解型EAE大鼠脊髓中神经干细胞增殖变化和α-硫辛酸的干预作用.pdf

≥!，以i?j 目 录 中文摘要………………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………4 研究论文复发缓解型EAE大鼠脊髓中神经干细胞增殖变化及Q一硫辛酸 的干预作用 前言……………………………………………………………………………………………………“7 翮青……………………………………………………………………………………………………“， 材料与方法…………………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………………………………………12 附图……………………………………………………………………………………15 附表…………………………………………………………………………………………………·21 讨论…………………………………………………··………………………………………………·21 参考文献……………………………………………………………………………·26 综述神经干细胞在多发性硬化中的研究进展………………………………·30 致谢……………………………………………………………………………………………………39 个人简历………………………………………………………………………………·40 中文摘要 复发缓解型EAE大鼠脊髓中神经千细胞增殖变化及Q一硫辛酸的 干预作用 摘+要 目的：多发性硬化(multiple nerval (centralsystem，CNS)白质脱髓鞘为主要病理特点的自身免疫性疾 autoimmune 病。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental 神经系统内小血管周围单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性 疾病， 在发病机制和病变表征等方面与MS极为相似，作为一种实验动 物模型被广泛用于研究MS。 已有人报道在脑及脊髓损伤情况下，神经干细胞标志物表达增多，但 关于神经干细胞在EAE大鼠发病、缓解、复发过程中脊髓中表达情况未 见报道。 在MS的发病机制中，氧化应激起着非常重要的作用。Q．硫辛酸作为 一种很强的天然抗氧化剂，已引起人们的广泛重视。它主要通过清除自由 基，螯合金属离子，再生其他抗氧化剂而发挥其抗氧化作用。但目前关于 Q．硫辛酸对MS的研究很少，我们研究发现Q．硫辛酸可以显著降低其发 病率，减轻病情，其作用是否与促进神经干细胞增殖有关尚不清楚。 本实验旨在通过对EAE大鼠发病过程中脊髓中神经干细胞相关指标 程中神经干细胞的增殖情况及意义。并通过Q．硫辛酸对EAE大鼠的干预 来观察神经干细胞相关指标的变化，了解Q．硫辛酸对神经干细胞增殖的 影响，从而为临床治疗MS提供新的思路和实验依据。 方法： 分出正常对照组6只，其余动物用新鲜豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)诱导 免疫，待动物第一次发病后随机选出发病组大鼠6只，其余平均分为EAE 两个亚组，每亚组6只，硫辛酸组动物没复发者，按预实验中统计的EAE 中文摘要 组动物缓解复发平均天数分为干预后7天组(缓解期)和干预后14天组 (复发期)。 2模型制备：将新鲜豚鼠全脊髓制成匀浆，加上完全福氏佐剂(complete Freund’s 只分别于大鼠四肢足垫和背部皮下注射。硫辛酸组于动物发病后(神经功 能评分达2分)第一天起给予相应剂量腹腔注射，连续注射7天 (100mg．kg-1．d。1)o 3神经功能评分：于免疫诱导当日及免疫后每天对动物的体重变化、精神 状态、活动情况进行观察，并对动物进行神经功能评分，采用国际通用的 Kono评分标准，分为5分：0分，正常；1分，动物尾部无力；2分，尾 部无力+肢体无力；3分，肢体轻度麻痹；4分，肢体严重麻痹，被动翻身 后不能复原；5分，濒死状态或死亡。EAE大鼠以神经功能评分达2分或 以上者为动物模型成功的标准。 4免疫组织化学染色：在动物麻醉状态下，快速取其脊髓中腰膨大处组织， 抗，经二抗，三抗孵育，DAB显色，苏木精复染，脱水透明，