大鼠肝星状细胞促进肝癌生长、侵袭和调控免疫微环境的实验研究.pdfVIP

博士论文 中文摘要 大鼠肝星状细胞促进肝癌生长、侵袭及调控免疫微环境的实验研究 中文摘要 肝细胞肝癌(hepatocellular 肿瘤之一，位居世界恶性肿瘤死因第三位，每年至少有610，000死亡病例(其中 约半数病例发生在我国)。尽管过去的数十年里肝癌的细胞和分子生物学研究取 得很大进展，肝癌的预后仍然很差。手术切除是肿瘤综合治疗中效果最好、使患 者获得长期生存最有效的途径，但肝癌根治性切除后5年复发转移率仍高达 60％一70％。同时我国肝癌多发生于肝炎(乙型肝炎和丙型肝炎)的基础上，多伴 有严重的肝硬化，相当多的原发性肝癌因严重的肝硬化无法手术切除。系统性治 疗(包括化疗、分子靶向治疗)是应用广泛、正在深入研究中的主要治疗方法， 但治疗数月后肿瘤迅速进展恶化(进一步增殖、转移)成为影响疗效的主要障碍。 以基因组、蛋白组和组织芯片为代表的高通量分子生物学技术的出现和发 展，为研究肿瘤发生、进展和转移提供了有力的手段，然而以往对HCC的研究 大多只把重点放在肝细胞恶变上，而忽视了间质细胞在其中的重要作用。肿瘤侵 袭与转移是一个多步骤多因素参与的复杂过程，其发生依赖于肿瘤细胞与基质之 间的相互作用。间质细胞在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用，参与调节肿 stellate 瘤血管生成、结缔组织纤维形成、肿瘤免疫等环节。肝星状细胞(hepatic 滴，HSC约占肝脏细胞总数的13％。HSC位于Diss间隙，具有长的分枝状的细 胞突起，通过这些细胞突起包绕肝细胞并与肝窦内皮细胞形成紧密接触，为HSC 和肝细胞的相互作用奠定了生理解剖学基础。HSC活化是肝纤维化形成，并最 终发展至肝硬化的核心环节。“肝炎．肝纤维化／肝硬化．HCC”被认为是肝癌发生 过程中的三部曲。HSC在“炎症．纤维化．肿瘤这一发生发展过程中充当了重要 的介质。近年来研究提示HSC活化在HCC的发生、发展和转移中可能扮演重要 角色，通过增强分泌细胞因子、趋化因子、生长因子和ECM蛋白、降低ECM 的降解而起作用。而且，在肝癌的间质中伴有活化HSC／MBF(肌成纤维细胞) 的浸润，活化的HSC可能通过释放包含生存信号的旁分泌因子促进肝癌形成， 机制尚不明。临床证据显示癌周HSC往往和肝癌的早期复发相关。目前为止， 普遍认为HSC的基本的非免疫学功能包括维生素A代谢平衡、肝纤维化和调节 肝脏血流。更深入的研究发现了HSC的新的功能，HSC具有潜在的免疫学作用。 近来研究提示HSC活化在HCC的发生、发展和转移中可能起了至关重要的作用， 博士论文 中文摘要 然而具体的作用机制仍然不详。 课题组前期实验证实了肝癌相关活化的HSC功能是不同于培养活化的 HSC，初步证明瘤内活化HSC促进T淋巴细胞凋亡有助于肿瘤细胞的运动和侵 的发生、发展、浸润和转移，其中活化的HSC对免疫微环境的抑制是可能的作 用机制之一，HSC在HCC内的免疫学功能如何，与肝癌的复发转移是否相联系， 有待进一步的研究。 本课题将活化的大鼠HSC与肝癌细胞共培养，首次证实活化HSC通过旁分 泌改变McA-RH7777肝癌细胞多个基因的表达，在体外促进肝癌细胞增殖、迁 移、侵袭；体内进行HSC与HCC相互作用研究，活化的HSC在大鼠皮下促进 肝癌的增殖、侵袭，并伴有免疫微环境的变化；在体外细胞相互作用研究中， HSC促进T细胞凋亡，但未促进DC细胞凋亡；并探索经肝门静脉输注DC细胞 改善肝脏局部免疫微环境，为体内肝癌免疫治疗研究、预防肝癌复发转移寻找新 的方法和途径。 第一部分 大鼠肝星状细胞在体外改变肝癌细胞功能基因表达，促进肝癌细胞增 殖、迁移和侵袭 【摘要】目的：分离并鉴定大鼠肝星状细胞(HSC)，在体外活化的HSC可以通 过外分泌调控肝癌(HCC)细胞的功能基因表达，促进HCC细胞的增殖、迁移 和侵袭。方法：密度梯度离心分离HSC，制备大鼠McA．RH7777肝癌细胞株的 Western blot对芯片结果进行验证。制备活化HSC的CM，通过CCK-8