大鼠脊髓损伤后EphrinB1表达及其及Bcl-2Bax相关性的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 相关性的实验研究 目 的 cord 脊髓损伤(spinalinjury，SCI)是临床骨科常见的一种致残性疾病。SCI 包括原发性损伤和继发性损伤，脊髓损伤引起的细胞凋亡加重了脊髓的原发性损 伤。SCI后细胞凋亡主要发生在损伤的邻近部位，通常发生在损伤8小时内：而 神经胶质细胞的凋亡时间更长，损伤第7天时自质内发生的第二波凋亡。凋亡是 一个复杂病理生理过程，受多种凋亡相关因子调控。Bcl-2基因家族就是其中之一， 其共同特征是在各自的分子上均有Bill和BH2同源结构，但它们的作用却各不相 同。Bcl-2是一种具有抗凋亡作用的因子，而Bax为一种具有促凋亡作用的因子。 Bci．2／Bax反映凋亡的趋势。轴突导向因子Eph家族是受体酪氨酸激酶家族最大的 成员，目前在哺乳动物已发现16个Eph受体和9个Ephrin配体。目前的研究发 现Eph参与中枢神经系统损伤后细胞凋亡调节。Ephm缺失小鼠创伤性脑损伤后 室内灌注大量可溶性的EphrinB3-Fc可逆转细胞增殖和凋亡，并阻止刨伤性脑损 伤诱导的细胞增殖。Ephrin-A5诱导脊髓腹侧神经元凋亡，并参与调节脊髓形态发 生和轴突导向。EphA7反义寡核苷酸抑制大鼠SCI后神经细胞凋亡，并促进了神 经传导功能的恢复。EphrinBI是第一个被克隆的EphrinB族成员，最初被认为是 Eph受体连接蛋白和维甲酸敏感基因，胚胎期广泛表达，成年期表达下降。小鼠 脑损伤后Ep晡nm呈时空依赖性表达上调，参与星形胶质细胞活化和轴突再生。 背根切断术增加了背根神经节中EphrinBl表达，并未引起脊髓组织中EphrinBl 升高；组织学检测结果显示EphrinBl主要表达于中、小背根神经节的神经元，脊 髓背侧浅层神经元和IB4阳性伤害性末端。近年研究发现EphrinBl-Fc促进小鼠 胚胎胸腺细胞凋亡和淋巴细胞的凋亡，这种作用与Akt激活和抑制Fas受体引发 的半胱天冬酶蛋白水解有关。关于SCI后EphrinBl在胶质细胞的表达情况及其与 凋亡相关性的研究目前尚未见报道。 神经细胞凋亡的调节。 第一，根据Allen氏原理制作大鼠SCI模型，通过功能学评分和组织病理学检 测评估脊髓损伤模型的可靠性。 第二。检测大鼠脊髓损伤后不同时间点EphrinBl的表达变化特点。 第三，检测大鼠脊髓损伤后不同时问点Bcl．2、Box的表达变化并分析Bcl-2／Bax 值与EphrinBl的表达变化的相关性。 方法 1．60只雌性Wistar大鼠随机分为脊髓损伤3、7、14、2列组，假手术组和正 观察SCI后大鼠神经功能情况，通过HE染色观察组织的病理学改变。 2．应用免疫组织化学、免疫荧光方法检测大鼠脊髓组织中EphrinBl的表达及 分布情况。利用Real-Time mRNA的表达变化； PCR技术检测脊髓组织中EphrinBl Western Blot检测脊髓损伤后不同时间点EphrinBl蛋白的表达变化，并利用统计 mRNA与蛋白表达的相关性． 软件分析脊髓损伤后EphrinBl 3．应用免疫荧光方法检测大鼠脊髓组织中Bcl．2和Box的表达情况。利用 Real．Time Blot PCR检测各组脊髓组织中Bel．2和8axmRNA的表达变化；Western 检测脊髓损伤后不同时间点Bcl．2和Box蛋白的表达变化；应用统计软件分析Bcl一2 和Box 结 果 1．Rivlin斜板实验结果显示损伤组倾斜平面临界角度值较正常组和假手术组 明显下降(P0．05)。Tarlov评分正常组和假手术组为6分，损伤3d组小于2分， 2 损伤7d、14d组小于3分，损伤28d组部分评分超过3分；损伤组与正常组和假 手术组相比差异显著(PO．05)。HE染色结果显示，正常组和假手术组脊髓的形 态结构完整；损伤脊髓出现灶性出血、肿胀。神经元和胶质细胞凋亡，结构破