大鼠脑出血后Nrf2-ARE信号通路对灶周神经保护作用和内源性神经干细胞激活的机制研究.pdfVIP

摘要 摘要 目的：第一部分：近期研究发现Nm(核转录因子．2)／ARE(抗氧化反应元件)信 号通路在体内具有抗氧化应激作用、抗炎性反应和神经细胞保护作用。本部分 研究采用莱菔硫烷激活Nrf2．ARE信号通路，维甲酸抑制Nrf2．ARE信号通路， 观察Nr亿．ARE信号通路对脑出血灶周神经保护作用及其相关机制探索；第二部 分：有文献报道脑损伤后脑内各部位有内源性神经干细胞激活和增殖，且向灶 周损伤区域迁徙，但相关机制不明确。本部分研究脑出血后内源性神经干细胞 激活增殖及相关TGF．B机制的探讨。 方法：第一部份：采用SD大鼠基底节自体动脉血注射法建立脑出血模型，分四 组：单纯脑出血组、莱菔硫烷(N咆激活剂，SFN)处理脑出血组和维甲酸(RA， N砣抑制剂)处理脑出血和正常对照组，观察不同时间点大鼠神经功能评分， 取脑组织行免疫组化检测，免疫荧光检查及Western blot检测Nrf2、HO．1、NF．r,B 表达。对所得数据进行统计分析，观察脑出血灶周神经保护的作用。第二部分： 采用SD大鼠基底节自体动脉血注射法建立脑出血模型，随机分成假手术组、单 纯脑出血实验组，分别按1d、7d、14d、21d分为4个亚组，观察不同时间点大 鼠神经功能评分，取脑组织行免疫荧光双标检查Nestin与BrdU共表达情况，免 疫组化TGF．p表达。对所得数据进行统计分析，观察脑出血灶周神经保护的作 用。 结果：第一部份：SFN处理激活Nrf2大鼠组脑出血后与单纯脑出血组比较，神 经功能障碍明显减轻；与单纯脑出血组及比较，SFN处理激活Nrf2大鼠组免疫 荧光、western 达高峰值，SFN处理激活Nrf2大鼠组NF．r．B表达下降，免疫组化检测脑出血小 胶质细胞活化明显；RA处理脑出血组大鼠死亡率最高，神经功能损伤严重，检 测Nrf2转录因子、HO．1抗氧化蛋白表达均较SFN干预组和单纯脑出血组低， 持续性抑制作用可能持续5天左右，RA处理抑制Nrf2大鼠组NF．rB表达下降， 免疫组化检测提示脑出血小胶质细胞活化明显且持续时间至5天。第二部分： 本实验可观察到：1)单纯脑出血组免疫双标阳性细胞于7d开始有表达，持续 摘要 胞少，差异均有统计学意义(Po．01)。说明脑出血后的确有内源性神经干细胞的 激活增殖。3)假手术组TGF．13在细胞质中有较少的表达。单纯脑出血组TGF．B 阳性细胞在ld时无明显增多，于3d开始增多，可见大量浆着色的阳性细胞， 7d达高峰，持续性增多至21d。说明脑出血后TGF．p的表达与内源性神经干细 胞相关，可能参与内源性神经干细胞的激活增殖。 结论：1)大鼠脑出血后存在急性炎症损伤；2)莱菔硫烷激活Nrf2．ARE信号通 路可提高HO．1、NQ01抗氧化酶表达，减轻脑出血后灶周炎性反应，提高神经 保护作用；3)小胶质细胞在脑出血早期活化后具有神经毒性作用；4)脑出血 能参与脑出血后ENSCs激活、增殖。 关键词：脑出血；灶周损伤；Nrf2．ARE信号通路；内源性神经干细胞；神经修 复 Abstract ——。————————————————————————————————————————————一 ABSTRACT foundthat factor I：Recentstudieshave Nrf2(nucleartranscription obiective：Part rolein playimportant element)signalingpathway ．2)／ARE(antioxidantresponse mV1VO·[his