黄芩苷对TCR+Vβ、CD79、IL-1RⅠ+mRNA表达影响.pdfVIP

第1章引言 第1章引言 黄芩(Scutellariabaicalensis)为唇形科多年生草本植物的干燥根，又名黄金 茶、山茶根、烂心草，作为药用已有上千年的历史。其味苦、性寒，具有清热解 毒、凉血止血、除热安胎的功效…。其有效成分是黄酮类化合物，以黄芩苷、黄 芩素为主。研究报道黄芩苷具有抗病毒【2卅，抗炎【5】，抗细菌内毒裂61、外毒素【7】 作用，诱导肿瘤细胞分化嘲及凋亡【91，抗氧化【5’1们，免疫调节【ll-141等广泛的药理 作用。其中对黄芩苷的免疫调节作用的研究已经越来越受到医学工作者关注。 目前国外研究已经肯定了黄芩苷对免疫功能的调节作用【l¨，国内对黄芩苷 的免疫调节作用的研究也较多，尹琰等【l2】研究发现心肌梗死模型大鼠外周血 能紊乱得到改善，表现血液CD3细胞数，CD4／CD8比值均接近正常。高天芸等【13】 研究发现黄芩苷能明显改善化疗药物导致的免疫功能低下小鼠模型的免疫功 mg、10 能，表现高、中、低(40mg、20mg／kg)剂量黄芩苷均能显著提升免疫 (PO．01)；高、中剂量组黄芩苷能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞 噬指数(P0．01)；黄芩苷还能明显改善化方药物导致小鼠骨髓造血功能低下的 不良反应。本实验室既往研究也发现黄芩苷分别作用小鼠T、B淋巴细胞后可显 B淋巴细胞增殖有明显协同作用(PO．01)[14l。因此，黄芩苷有望成为一种新型 的免疫调节剂。 然而，无论是国内还是国外，目前对黄芩苷免疫调节作用的研究主要集中在 细胞水平，对其分子机制的探讨还非常缺乏，且尚无关于黄芩苷免疫调节受体 的研究报道。鉴于既往研究已证实黄芩苷作用的免疫靶细胞主要包括T、B淋巴 1分别是T、B淋巴细胞和单核细胞表 细胞和单核细胞，而TCR、mIgM、IL．1R 面的主要免疫受体之一，因此，本课题在本室前期摸索的黄芩苷最佳体外作用 浓度[14-1S]的基础上，应用实时荧光定量PCR法从分子水平上研究黄芩苷对人T细 胞TCRmRNA、B细胞CD79mRNA、单核细胞IL．1RI VD mRNA相对表达的影 响，并结合单克隆抗体封闭、拮抗剂竞争抑制受体等手段进一步探讨TCR、mIgM、 第1章引言 IL．1R I是否是黄芩苷作用的受体，为黄芩苷免疫调节机制的深入研究奠定基础。 2 第2章材料与方法 第2章材料与方法 2．1实验材料 2。1。1实验用药物及细胞 黄芩苷(纯度≥98％) 江西中药研究所 人外周血浓缩白细胞 江西省血液中心 2．1．2主要试剂 鼠抗人TCR(a13)单克隆抗体 美国BD公司 F(ab’)2 美国SouthenlBiotech公司 鼠抗人mlgM 重组人IL-1ra 北京百奥瑞普生物技术有限公司 RevertAidTMFirstStrand—cDNAKit Fermentas(MBI)公司 Synthesis SYBRGreen Kit 北京全式金生物有限公司 qPCR Trizol试剂 北京全式金生物有限公司 DEPC 美国Sigma 引物合成 上海生工生物公司 Ficoll分离液