短期热量限制对老年大鼠肾脏衰老及急性肾损伤的保护作用.pdfVIP

摘要 摘要 背景与目的：肾脏是伴随着衰老而出现明显形态和功能改变的重要器官之 一，老年人群是慢性肾脏病和急性肾损伤(Acute kidneyinjury，AKI)的高危人 群。在模式生物及动物实验研究证实，热量限制(Calorierestriction，CR)是一 种可维护健康并能延长寿命的安全有效措施。老年人肿瘤发生率高，顺铂作为 一种被广泛应用的肿瘤化疗药物，其常见且十分严重的副作用是引起AKI。肾 小管上皮细胞凋亡是顺铂导致AKI的主要发生机制之一。有实验研究表明长期 CR可减少细胞凋亡，但是短期CR是否具有同样的保护作用尚不清楚。本实验 通过对25月龄老年大鼠进行短期(8周)CR，观察对肾脏衰老相关指标的影响； 然后建立顺铂诱导的急性肾小管上皮细胞凋亡的体内、体外实验模型，观察短 期CR能否减少顺铂造成的肾小管上皮细胞凋亡，并探讨其中的可能机制。 方法：1、对25月龄老年SD大鼠随机分为自由饮食组和短期(8周)热量 限制组，于观察期间不同时间点测量大鼠体重、肾重、24h尿蛋白定量、血肌酐、 尿素氮、胆固醇、甘油三脂、血清白蛋白及总蛋白变化，并通过Westernblot检 1、 测衰老相关指标，包括能量代谢主控蛋白SIRTl，自噬相关蛋白LC3、Beclin 测。 2、应用顺铂(6mg／kg)腹腔注射建立体内顺铂诱导的急性肾小管损伤模 型，以自由饮食老年大鼠为对照组，研究短期CR对老年大鼠急性肾小管损伤的 调控作用。两组老年大鼠分别于注射后48h、72h收集大鼠血清及肾脏组织标本， 通过分析肾功能指标和肾组织病理变化，比较CR组与对照组肾脏的损伤程度， 并通过Westernblot检测SIRTl及凋亡标志性蛋白Cleaved caspase．3在肾脏组织 中的表达变化。同时，用100M的顺铂刺激人肾小管上皮细胞(HKC)在体外 建立肾小管上皮细胞凋亡模型。细胞实验分为对照组(Con)和体外热量限制模 拟组(CRs)，体外热量限制模拟组采用CR组大鼠灭活的血清培养。HKC细胞 经无血清DMEM同步14-16h，分别以自由饮食和热量限制的大鼠血清培养6．8h 后，再以lOI．tM顺铂刺激24h，Western I 摘要 c弱p弱e．3的表达变化。通过体内与体外实验共同探讨短期CR、SⅡ盯1与Cleaved caSp雒e．3的相互关系，揭示短期CR是否对顺铂诱导的急性肾小管上皮细胞凋亡 具有保护作用。 结果：1、与3月龄青年大鼠比较，27月龄老年大鼠的肾功能水平下降，但 血脂水平显著升高。与老年自由饮食组比较，短期CR组老年大鼠的体重、24h 尿蛋白总量及血清甘油三酯明显降低(p0．05)。短期CR组较自由饮食组老年 大鼠肾脏组织中SⅡ盯1和自噬相关蛋白LC3、Beclin l均升高，而p62、 及C1eaVed casper3均显著降低(矿0．05)，而Bax无显著变化。 2、老年大鼠经腹腔注射顺铂72h后发生急性肾损伤，血清肌酐及尿素氮均 有显著升高：肾组织病理学结果显示：肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性或颗粒 样变性，肾小管上皮细胞出现凋亡表型一细胞核固缩，以及细胞脱落、坏死。 而顺铂对短期CR大鼠引起的急性肾小管病理损伤均较对照组轻。利用Western blot检测Cleavedcaspase．3研究顺铂诱导急性肾损伤模型中细胞凋亡的发生情 况。对照组大鼠肾组织中Cleavcd casper3蛋白的表达呈上升趋势，在72h达到 高峰；短期CR大鼠肾脏组织中Cleaved c唧勰e．3表达也有增加，但48h和72h 均显著低于对照组。同时利用Westernblot方法检测了老年大鼠肾脏组织中 S瓜T1蛋白