过度训练大鼠肾组织热休克蛋白70的表达和山莨菪碱干预的研究.pdfVIP

中文摘要 过度训练大鼠肾组织热休克蛋白70的表达及 山莨著碱干预的研究 摘 要 acute kidney 的重要疾病，但其发病机制和损伤方式尚不清楚，目前尚缺乏有效的防治 shock 方法。热休克蛋白(heat 激反应的生物标志及内源性保护蛋白，其表达的强弱与组织细胞的损害程 shock 度有关。其中热休克蛋白70(heat 70，HSP70)在生物细胞中 protein 含量最高，受到诱导最强，应激后生成最显著，具有多种生物学功能，对 细胞有明确的内源性保护作用。本研究采取大鼠无负重单次游泳至力竭建 立过度训练引起的急性肾损伤的模型，研究过度训练大鼠肾组织细胞 HSP70的表达规律及其与肾组织细胞凋亡的关系，并观察山莨菪碱对 HSP70表达的影响，探讨其作用机制。 方法：(1)清洁级雄性SD大鼠48只，体重1 80--2209，按随机数字 药物；力竭组又根据力竭后恢复时间不同分为力竭后即刻组(ESI)、力竭 后6小时组(ES 24h)三个亚组，且各弧组大鼠 6h)幂g力竭后24小时组(ES 干预组也根据力竭后恢复时间不同分为山莨菪碱6h组(AD6h)矛D山莨菪 碱24h组(AD24h)两个亚组，各亚组大鼠于运动前20min给予山莨菪碱注 射液10mg／Kg一次性腹腔注射。每个时间点均为8只大鼠。采用大鼠无 负重单次游泳至力竭建立过度训练引起急性肾损伤模型。(2)于各时间点， 5％的水合氯醛(3ml／kg)腹腔注射麻醉，摘取两侧肾脏，将左侧肾脏放 入EP管，迅速放入液氮中，．80℃冰冻保存，待用于Westernblot技术检 测肾组织HSP70的表达。右侧肾脏置于4℃4％多聚甲醛中固定，制作石 蜡切片。(3)采用HE染色光镜下观察肾组织病理形态学变化。(4)采用免 疫组化染色(PV法)观察肾组织HSP70的表达情况，并应用图像分析系统 中丈摘要 对免疫组化结果进行半定量分析。(5)应用Westernblot技术检测肾组织 13．0软件包 HSP70表达的变化。(6)统计分析：所有实验数据均采用SPSS 进行统计学处理，实验数据均以均数4-标准差(牙±S)表示。组间比较采用 单因素方差分析(one．wayANOVA)分析，以P0．05认为有统计学意义。 结果：(1)无负重单次游泳至力竭后大鼠表现为极度疲劳的神态，精 神萎靡，对外界刺激反应迟钝，胸腹着地，无法站立，活动困难，严重者 可有球结膜出血的现象。力竭运动组大鼠约2h后方可自由活动，进食水 情况欠佳，而山莨菪碱干预组大鼠约20min后可自由活动，基本可正常 进食。(2)正常对照组大鼠肾组织结构无明显变化。力竭后即刻组、力竭 后6h组肾组织结构改变轻微，有部分肾小球囊、肾小管扩张，近端肾小 管上皮细胞水肿，出现空泡变性：力竭后24h组大鼠肾组织结构改变明显， 在皮髓质交界处及髓质可见大量细胞的细胞核深染及固缩现象，间质可见 浸润细胞，肾小管上皮细胞的刷状缘出现不规整甚至脱落的改变。山莨菪 碱6h组及山莨菪碱24h组较同期单纯力竭组比较大鼠肾组织结构改变明 显减轻。(3)免疫组化染色检测肾组织HSP70的表达：阳性细胞多为肾小 管上皮细胞，肾小球几乎无表达，且肾髓质中的细胞表达强于肾皮质。正 常对照组大鼠’肾组织中有较弱的HSPT0的表达。力竭运动组大鼠随恢复 时问的延长，肾组织HSP70蛋白的表达水平呈逐渐增高趋势，且同正常 对照组相比均有统计学意义(P0．05)。山莨菪碱干预组大鼠肾组织中 HSP70的表达较同期力竭组比较阳性细胞数增加，且表达强度明显增强 blot技术检测肾组织HSP70的表达：在内参 (