靶向性CD3-PEG-PEI-SPIODGK纳米复合物在肝移植术后免疫耐受的探究.pdfVIP

1／fIII／ffllllllIII／lllllII|||．．IIIII．．．．．．．rlflfll11111f IIIl舢llll 刿Illllllll Y1 目 录 缩写词…………………………………………………………………………………l 中文摘要………………………………………………………………………………3 英文摘要………………………………………………………………………………5 前 言……………………………………………………………………………………………………………7 一、材料与方法…………………………………………………………………．9 1．实验材料………………………………k………………………………．9 2．实验方法………………………………………………………………。12 二、实验结果…………………………………………………………………20 1．重组质粒DGK基因的构建……………………………………………20 2．PEG．PEI．SPIO的合成…………………………………………………．21 3．pDNA的复合物制备及表征……………………………………………23 4．体外毒性实验…………………………………………………………．．26 5．细胞摄取复合物实验…………………………………………………。27 6．基因转染效率…………………………………………………………。30 三、讨论………………………………………………………………………35 d、 结…………………………………………………………………………………………………………．38 参考文献……………………………………………………………………………．39 附件…………………………………………………………………………………44 致谢…………………………………………………………………………………………………………．46 博士后出站报告 DAG(diacylglycer01) DGKs(DAGKinases) Taq酶 dNTP FBS DEPC EDTA EB 砀 Tc TCR SPIO CDI mPEG．0H NHS DAPI IL一2 mPEG．CDI PEG．PEI Ho．PEG．NH24 mal．PEG．oH 博士后出站报告 mal．PEG．C00H FITC DMSo N／P比 聚合物载体 、鹏(WestemBlot) CPM TEM 、№T．_8 SPF 博：l二后出站报告 靶向性纳米复合物在肝移植术后免疫耐受的研究 纳米复合物在肝移植术后免疫耐受的研究 中文摘要 在移植领域中，诱导一种持久稳定且无需药物的免疫耐受是迫切需 要解决的问题。这些问题迄今尚未解决，也正是本研究试图回答的问 题。器官移植术后，免疫耐受的诱导是一个多因素、多阶段的复杂过 程，针对免疫排斥反应中的一些关键环节专门设计调节、阻断手段， 可以达到抑制免疫排斥反应目的。尤其对于那些手术后免疫抑制剂药 物的毒副作用严重患者，限制其进一步慢性移植物失功发生的措施是 提高生存率和改善生存质量的关键。因此寻找一个能调控多个转移相 关因素的关键分子和其相应的信号通路显得尤为重要。DAGs是T淋 巴细胞活化的关键。但是当DAGs被甘油二酯酶(DGKs)作用后，T 细胞不再对目标作出反应。因此，DGKs是设计抑制免疫排斥反应措 施的理想靶点。如果能构建一种真核表达载体，转染到T细胞内，使 T细胞高表达DGKs，将可能导致T细胞无反应性，诱导免疫耐受。 在本研究中，我们首先构建了大鼠DGK的真核表达质粒。我们将 3xflag．N的空载体中，成功的构建了可以高表达大鼠DGK蛋白的真核 质粒。为研究DGK在体外细胞、体内肝移植模型上移植免疫排斥， 打下实验基础。 T细胞通常情况下难以转染，因此我们