靶向AURKA的siRNA抑制喉癌Hep-2细胞生长体内外探究.pdfVIP

中文摘要 Kinflse 目的：研究Aurora激酶A(AuroraA，AURKA)在喉鳞状细胞癌中的表 达及其临床意义，研究AURKA基因沉默在体外体内对喉癌HEp．2细胞生长的 影响及其机制。 方法：收集37例喉鳞状细胞癌组织和邻近正常组织，应用实时荧光RT-PCR和 Western blot技术检测AURKAmRNA和蛋白在喉癌及邻近正常组织中的表达， 分析AURKAmRNA和蛋白与喉癌临床病理特征的关系。 mRNA和蛋白表达，CCK．8实验检测细胞增殖， 测HEp．2细胞转染前后AURKA Transwell实验检测细胞侵袭，软琼脂实验观察克隆形成能力，流式细胞术检测 细胞周期分布、凋亡和有丝分裂监控点，免疫荧光实验观察细胞间桥、多极纺锤 体和多中心体等染色体不稳定性事件，Westemblot检测细胞粘附和迁移的重要 入荷瘤裸鼠，观察VX．680对肿瘤生长的影响。 结果：32例(86．5％)病人肿瘤中的AURKAmRNA高于相应的喉正常黏膜， AURKAmRNA在喉癌组织中表达上调，显著高于喉正常黏膜组织中的表达。25 期显著相关，而与患者性别、年龄、肿瘤部位、T分期和病理分级无相关性。喉 癌HEp．2细胞中AURKA蛋白也呈高表达。 HEp．2细胞转染AURKA AURKA沉默后，抑制HEp．2细胞增殖活性、侵袭和克隆形成能力，以及裸鼠体 默后，HEp．2细胞有丝分裂监测点被激活，减少HEp．2细胞染色体的不稳定性； 和基质金属蛋白酶．2(MMP．2)表达降低；最后，单独使用VX．680注射入荷瘤 裸鼠，肿瘤生长虽然有所减慢，但是与对照组相比差异无显著性。 结论：在喉鳞状细胞癌中AURKA呈高表达，与颈部淋巴结转移和Ill／IV分期相 关，AURKA基因沉默在体外体内均能抑制喉癌HEp．2细胞的生长和侵袭，并与 治疗提供重要的理论依据。 关键词：Aurora激酶；喉肿瘤；转移；RNA干扰；细胞侵袭；有丝分裂监控点； 染色体不稳定性：粘着斑激酶；基质金属蛋白酶 中图分类号：R739．65 注：本研究为2009年度上海生物医疗领域重点科技项目(09411950600)。 4 Abstract RNAinterferenceAurorakinaseA tumor targeting suppresses in human cancercells growth laryngeal the ofAurora Objective：Toinvestigateexpression kinase its A(AURKA)and association、析m in featureshuman cell clinicopathological laryngealsquamous theeffectsofknockdownofAURKAon carcinoma(LSCC)．Toinvestigate laryngeal cancer cellsboth／nvitroandinvivo． nEp-2 Methods：TheofAURKAmRNA expression and werestudiedreverse protein using andwesternblotinLSCCtissuesan