革兰氏阴性菌Ⅰ类整合子的检测.pdfVIP

革兰氏阴性茵中I类整合子的检测 硕士生姓名：高静华 指导教师：聂大平教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 目的：了解大连地区临床分离的革兰氏阴性细菌(其中大肠埃希菌和肺炎克 雷伯菌为超广谱B一内酰胺酶阳性菌株，铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌对临床的多 种药物耐药)中I类整合子的分布并研究其耐药机制。 方法：收集临床分离的无重复革兰氏阴性杆菌163株(包括40株大肠埃希菌、 45株鲍曼不动杆菌、40株肺炎克雷伯菌、38株铜绿假单胞菌)。采用K—B纸片 法测定163株革兰氏阴性菌的药物敏感性，双纸片协同实验确定大肠埃希菌及肺 炎克雷伯菌产超广谱B一内酰胺酶。药敏试验证实鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌是 多重耐药。煮沸法提取制备DNA模板，PCR方法扩增细菌的I类整合子保守区和可 I进行酶切分 变区，将PCR产物进行纯化并进行序列分析，用限制性内切酶ttinf 析，选取酶切产物中出现频率较高的0．15KB及1KB产物进行纯化分析及DNA序列 测定，将所得序列在GeneBank中搜索，确定所选取的两个片段I类整合子可变区 基因盒的种类及排列。 结果：在163株无重复革兰氏阴性杆菌中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌菌均 为产ESBLs，铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为多重耐药菌。40株大肠埃希菌中有 鲍曼不动杆菌检出I类整合子，40株肺炎克雷伯菌中有18株(45％)肺炎克雷伯 菌检出I类整合子，38株铜绿假单胞菌中有2l株(55．2％)铜绿假单胞菌检出I 类整合子。在96株一类整合子阳性菌株中，78株可变区扩增阳性，限制性内切酶 分析显示在大肠埃希菌，鲍曼不动杆菌，肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌中均出现。 片段内不含有基因盒，但是含有整合子的5’和3’保守区的结构。lkb片段，预 计基因盒种类为aadA，为氨基糖苷类耐药基因，但是测序结果不成功，原因有待 查明。 结论：本次试验中可以看出，在临床上I类整合子广泛的存在于大肠埃希菌， 鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中，这提示在临床上I类整合子对大肠埃希菌，鲍 曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐药性的传播起着很重要的作用。但是肺炎克雷伯菌 与全国一些其他地区嗍相比，其阳性率明显偏低。在选择性进行可变区酶切产物 的测序中，0．15kb片段内不含有基因盒，为整合子的5’和3’保守区的结构。但 是在进行可变区lkb的酶切产物测序中，测序结果不成功，原因有待于进一步查 明。 关键词：革兰氏阴性菌 I类整合子 2 DetectionofClassI in Bacteria IntegronGram--negative Postgraduate：GaoJinghua Nie Superviser：ProfessorDaping Specialty：ClinicalLaboratoryDiagnostics Abstract the ofClassI isolated objeetive：To gram— investigateprevalence integrons Bacteria coliandKlebsiella Escherichia negative elinically(ESBLs-producting