高温与卡铂对人肺癌细胞株生长的抑制作用和机制探讨.pdfVIP

高j昱与卡铂对^肺癌细胞株生长的抻制作用及机制探讨 中文摘要 ／一 ／‘ y，／ ， {背景知识及研矧目的：很久以来，肺癌一直是恶性肿瘤治疗领域的 一大难题，其治疗效果在近数十年中没有显著的提高。主要原因是肺癌 的生物学特性十分复杂，恶性程度高，临床上约有86％的肺癌患者在确 诊时已属晚期．因此，现代的肺癌治疗提倡外科、放疗、化疗及其他治 疗等多学科的综合治疗．高温治疗肿瘤的历史可以追朔到100多年前， 用科学的手段对高温进行的实验研究开展于20世纪60年代，同时加温 治疗在临床的工作也取得了可喜的成果，尤其是与化疗联合治疗晚期复 发的难治性肿瘤。不过高温对肺癌的作用目前无论是在临床、还是基础 方面都研究得相对较少，，从有限的报道中可以看出，高温对肺癌细胞具 有一定的杀伤作用。j本题欲从细胞水平研究高温与化学药物对人肺癌细 胞株的影响，并试图探讨其作用机理，为临床高温联合化疗的应用提供 实验依据。 甜料与方法：细胞株为人肺鳞癌细胞株(L78)和人肺腺癌细胞株 (A549)。化学药物为注射用卡铂．采用细胞原位计数法观察两细胞株 实验前及实验后4天中的增殖状况，实验分为对照组、卡铂1组(10“ g／m1)、卡铂2组(20u∥m1)、高温组(42．5℃，1小时)、联合1组(10 u 各组细胞的生长曲线．周MTT法检测A549细胞各组实验处理48小时 后的细胞增殖抑制率。 及TUNEL法检测实验处理72小时后A549细胞的形态学及DNA含量等 变化，用免疫组织化学法检测其凋亡相关基目bc!一2、bax的蛋白表达。 这部分实验分为4组，即对照组，卡铂组(10u g／m1)、高温组(42．5℃， 1小时)和联合组(10“g／ml+42．5℃)． 对实验数据进行析因分析或F检验。 结果：细胞生长曲线实验显示，与对照组相比，高温组细胞的增殖 中文摘要 受到一定程度的抑制；L78细胞株出现差异(p0．05)的时闻是第2天， 而A549细胞株是第4天。卡铂I纽和卡铂2组对两细胞株的抑制作用 更加明确，细胞生长曲线均在第2天出现与对照组的明显差异。联合l 组、联合2组对A549细胞的抑制作用分别较卡铂1组、卡铂2组增强 (p0．05)，说明两种方式联合应周可获得更好的杀伤肿瘤细胞的作用； 联合1组对A549细胞的抑制作用甚至好于卡铂2组，提示与高温联合 应用时，可以一定程度地降低卡钻的剂量而不影响治疗效果：联合1组， 联合2组对L78细胞的抑制作用也分别好于卡铂1组、卡铂2组，但是 没有获得统计学差异。MTT法检剥各实验组对A549细胞的抑制率分别 4％， 为卡铂1组13_8％，卡铂2组263％，高温组8．6％，联合l组27 联合2组42．8％。除联合1组与卡铂2组外，其余每两组间均存在显著 性差异(p0．05)，与生长曲线实验的结果基本一致。 典型的细胞凋亡改变，部分细胞出现坏死，细胞分裂相减少。流式细胞 仪检测到实验各组G，M期细胞所占比例升高，对照组、高温组、卡铂组 和联台组的百分比分别为15．0％，18．7％，76．2％和772％，后两组与对 照组比较，G，M期细胞所占比例显著提高(p0．05)，但高温组与对照组 比较无统计学差异；流式细胞光度计分祈A549细胞对照组，高温组、 卡铂组和联合组的凋亡细胞百分率分别为3．49％，10_3％，9．13％和9．88％， 后三组与对照组比较，凋亡率显著提高(p0．05)，但它们之间没有显著 性差异。A549细胞的TUNEL法染色结果是，对照组几乎未见到阳性染 色细胞，高温组、卡铂组和联合组均存在阳性细胞，提示这三组细胞都 分发生了凋亡。用免疫组织化学方法检测A549细胞bcl一2、bax基因的 ‘ 蛋白表达情况，但是结果发现各组均末出现bcl．2或bax阳性细胞。? 结论：42．5C的高温可以使人类肺鳞癌细胞株L78和肺腺癌细胞株 A549的增殖受到一定程度的抑制