高氧致BPD新生鼠Z0-1调节肺上皮屏障结构和功能研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 高氧致BPD新生鼠ZO．1调节肺上皮屏障 结构及功能研究 ·^‘o‘， 刖 看 氧疗是临床上抢救新生儿呼吸衰竭最有效的方法之一，应用高体积分数氧进 行机械通气治疗虽然挽救了大量新生儿的生命，但也不可避免地导致了高氧肺损 伤的发生，严重者甚至发展成以肺部炎症和纤维化为主要特征的另一慢性肺部疾 病一支气管肺发育不良(bronchopulmonarydysplasia,BPD)。长时间吸入高浓度氧 气目前被学者们认为是BPD发生的最主要原因及最危险因素。临床上高氧诱导的 肺损伤仍是造成早产儿尤其是极低出生体重儿死亡或致残的主要原因之一，现已 成为威胁早产儿健康和生命的首要疾病，但其具体的发病机制至今尚未完全阐明。 因此，探索高氧致BPD的发生机制是国内外研究的焦点问题。 BPD的主要病理变化早已被证实，即是早期肺水肿，肺组织炎症反应以及晚 期肺组织的纤维化。目前有关其发病机理的研究多集中在BPD晚期肺纤维化的研 究，但间质纤维化一旦形成，将导致不可逆的呼吸循环障碍，威胁患儿生命。因 此，探寻BPD的早期发病机制，探索疾病发展的可逆转环节，对于该病的早期诊 断，早期防治尤为重要。以往的研究多着重于对肺组织炎症及氧化应激损伤机制 的研究，而对肺水肿机制的研究甚少，且目前抗炎、抗氧化的早期治疗对BPD却 没有取得确切的疗效。因此，本研究尝试以探索高氧肺损伤急性期…肺水肿形成 机制为切入点，试图为早产儿高氧肺损伤的早期防治奠定实验基础和提供理论依 据。以往研究表明肺泡上皮屏障功能异常与成人急性肺损伤密切相关，肺泡上皮 细胞问紧密连接(tightjunction，TJ)是维系和调控其屏障通透性的主要结构，设 想肺泡上皮细胞屏障功能异常在新生鼠高氧肺损伤急性期肺水肿的发生中也同样 发挥了重要作用，那么肺水肿时，紧密连接结构是否有改变，这种改变是否影响 了屏障功能，紧密连接中主要何种成分出现了变化、通过何种途径来完成呢?目 前尚不清楚。 ZO．1(zonula oecludens proteins．1)是紧密连接胞浆附着蛋白，在紧密连接起 中介和桥梁作用，其破坏后紧密连接的功能随之变化。到目前为止还没有发现缺 乏ZO．1的紧密连接；有报道称紧密连接链的形成必须有ZO-l中SH3／GUK结构 域的参与；敲除Tjp-1基因后，缺乏ZO-l的细胞间紧密连接形成延迟：ZO—l表 达水平下降或缺失，会造成TJ结构松散甚至分解，最终影响紧密连接屏障功能的 完整性。基于ZO．1的上述生理特性，在肺组织的特定表达方式及其在紧密连接的 重要作用提示我们探索ZO．1在高氧肺损伤急性期肺水肿肺泡上皮细胞通透屏障 中的作用。 II细胞所建立的肺上皮屏 本研究以高氧致新生鼠肺水肿模型和原代培养AEC 障模型为对象，采用透射电镜、Western blotting、RT-PCR及免疫荧光等技术从组 织、细胞、蛋白及核酸水平证实高氧肺损伤肺上皮ZO．1的表达变化及其作用，并 应用跨膜电阻测量记录模式和单细胞层示踪剂流量测定来证明暴露于高氧中的肺 上皮屏障结构和功能变化，阐明肺上皮细胞ZO．1表达异常导致肺内通透屏障受损 是高氧致肺水肿的重要机制。 实验材料及方法 一、动物模型制备 本实验在中国医科大学盛京医院实验动物中心完成。新生Wistar大鼠生后12h 之内随机分为高氧组(实验组)和空气组(对照组)。组置于玻璃氧箱中，持续输 开箱15rain，添水、饲料及更换挚料，并与空气组交换母鼠以免因氧中毒而致喂 0．21，具体方法及实验控制因素同实验组。 养能力下降。对照组F105： 二、标本采集和处理 每组分别于实验后l，3，5和7d随机选取15只称重，5％哥拉腹腔注射 (O．6ml／1009)麻醉后，分离气管，打开胸腔，暴露心肺，经气管缓慢注入4％多 聚甲醛，然后置于4％多聚甲醛中，412过夜，石蜡包埋，制作4Pm组织切片，用 2