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育亨宾生物总碱分离及纯化 　摘　要：本实验旨在将低含量的育亨宾生物碱纯化、富集，并分离其多种成分。选用8%育亨宾盐的粗品，先用酸溶碱沉和有机物萃取的提取方法得到较高含量的育亨宾生物碱，即纯化的育亨宾生物碱。然后用紫外分光光度法粗略的测定纯化的育亨宾生物碱的含量，再通过超高效液相色谱法精确的测定纯品的育亨宾生物碱含量。其分离可通过配置合适的洗脱液，过碱性氧化铝的柱子实现。最终获得纯度较高的育亨宾生物碱，并收集到其在柱层析过程分离开的各条带，即育亨宾生物碱的各种同分异构体，将其各种成分成功的分离开。经过碱性氧化铝的柱层析，将纯化的育亨宾生物碱分离为两条色谱带。 关键词：生物碱；育亨宾；纯化；分离 1材料与方法 1.1材料 1）实验原料。8%的育亨宾生物碱粗品。2）实验药品。95%乙醇、氢氧化钠、盐酸、氯仿、丙酮以及脱脂棉、油醚、氧化铝等（这些用于柱色谱法中柱内填充物），还有柱色谱法用到的洗脱剂。3）实验器材。烧杯、漏斗、分液漏斗、离心机机、超声波提取仪、旋转蒸发仪、真空抽滤装置、pH计、蒸发皿、色谱柱、紫外分光光度计、高效液相色谱仪、真空干燥箱等。 1.2方法 1.2.1 纯化育亨宾生物总碱的方法 1）酸溶碱沉法：所购买的粗产品为含量为8%的盐酸育亨宾，首先用pH为1的盐酸溶液40mL溶解盐酸育亨宾粗品4g，然后充分溶解2个h，使育亨宾充分的溶解在盐酸中，离心（4000转，5min）去除沉淀，得到溶液。加入石油醚，对所得的溶液进行萃取，去除粗品中含有的油类物质，用分液漏斗进行萃取，保留下层溶液。加入NaOH,调节调节pH为10，此时盐酸育亨宾变为育亨宾碱，不溶于水， 因此会析出。离心（4000转，5min），然后得到沉淀，用pH为1的盐酸溶液进行洗涤，洗涤完后再离心（4000转，5min），再用NaOH调离心后所得 的上清液pH为10，这样重复3次。离心3次后获得生物碱，进行干燥，得到育亨宾生物总碱的提纯物。2）有机物萃取法：用pH=10的NaOH溶液20mL溶解2g育亨宾粗品，充分溶解2h，使粗品中的育亨宾生物总碱充分析出。离心（6000转，10min），去除上清液，保留沉淀，将沉淀用真空干燥箱进行干燥，沉淀完全干燥。将得到的干燥沉淀用氯仿进行抽提，抽提15次，再将抽提后的溶液用旋蒸仪完全干燥。用甲醇溶液将上步干燥后的沉淀溶解，滴加水进行结晶，高速离心（10000转，15min）后得到纯化后的育亨宾生物总碱。 毕业论文 1.2.2 分离总生物碱的方法 1）采用柱层析法分离育亨宾生物碱。实验材料为纯化的育亨宾生物碱。试剂为甲醇，碱性氧化铝，甲醇：磷酸盐缓冲液：三乙胺（43:57:1）。仪器是玻璃层析柱，收集管，UV-2550紫外分光光度计。 先制备层析柱称取36g碱性氧化铝，用流动相充分湿润后倒入玻璃层析柱中，柱高达到23cm左右。柱子上层加一定量的流动相，避免固定相干燥而产生气泡。装好的柱子放置一晚上就可用于柱层析。 样品的处理，称取0.4g纯化的育亨宾生物碱，加适量的甲醇溶解，过滤得育亨宾的甲醇溶液，滤渣用甲醇多次洗涤，确保育亨宾全部转移到溶液中。称取2g碱性氧化铝粉末于小烧杯中，将育亨宾的甲醇溶液加入其中，碱性氧化铝充分吸收育亨宾。然后放置在空气中，使甲醇自然挥发完，剩下吸附了育亨宾的碱性氧化铝粉末。进行柱层析①先将玻璃层析柱下端的玻璃旋钮打开，使洗脱液流出，至洗脱液与固定相氧化铝等高。②将吸附了育亨宾的碱性氧化铝加入到层析柱中，在柱子上端加一块脱脂棉，然后加洗脱液，育亨宾即在洗脱液的洗脱下向下流动。③当黄色的条带快要流到层析柱的底端时，用收集管收集洗脱液，每管收集1mL左右，直至固定相的碱性氧化铝完全被洗脱成白色。④将收集到的洗脱液稀释50倍，通过紫外分光光度计在270nm下比色。 1.2.3 检测生物碱的方法 1）紫外分光光度计法测育亨宾生物总碱的含量。实验材料为纯化的育亨宾生物碱，试剂为1mol·L-1盐酸溶液。仪器为UV-2550紫外分光光度计，石英比色皿，小漏斗，微量移液器。一定浓度梯度的育亨宾母液的配制按表1进行配制： 准确称取育亨宾生物碱粗品，并量取适量盐酸作为溶剂，然后将盐酸按表1依次加入到盛有育亨宾生物碱粗品的小烧杯中。 将每份配制的溶液进行过滤，并进行多次洗涤。 表1 育亨宾梯度溶液的配制 梯度溶液溶液浓度（g·L-1）粗品质量（g）1mol·L-1的盐酸体积（mL） 10.020.00520.0 20.050.01016.0 30.100.02520.0 40.200.05020.0 50.500.10016.0 61.000.25020.0 71.500.40021.6 82.000.50020.0 92.500.50016.0 103.000.75020.0 样品溶液的配制，按表2进