黑素细胞培养异体移植治疗白癜风的实验及初步临床研究.pdfVIP

黑素细胞培养异体移植治疗白癜风 的实验与初步临床研究 中文摘要 白癜风是一原发性局限或泛发的皮肤色素脱失性疾病。I目前认 为其发病机制是多基因遗传的、在多种内外因子的激发下表现为免 疫功能紊乱，导致黑素细胞的破坏，终致色素脱失。治疗方法除常 规的口服、外用药物外，对难治性白癜风可采用手术移植。移植治 疗有表皮移植和黑素细胞移植。目前，国内主要采用自体表皮移植 治疗，国外已普遍开展自体黑素细胞培养移植治疗。但是自体移植 存在着供皮问题，萌者只能治疗与供皮区同样大小的区域，后者虽 经培养后可大大增加黑素细胞的数量，但取皮区留下疤痕让患者难 以接受。此外，白癜风塞者的黑素细胞遗传缺陷，使得部分自体移 植治疗失败。由此彳我们希望通过异体黑素细胞培养移植治疗白癜 { 风。 r l可行性：在同种异体移植时，由于移植物中含有受体体内所缺 如的移植抗原，通过受者的抗原提呈细胞处理后，以一定形式抗原 来激活受者的免疫活性细胞而引起移植免疫排斥反应。激发移植排 斥反应的过程，除MHCI类基因编码的抗原与T细胞前身和B细胞 直接结合外，更重要的是MHCII类基因编码的抗原，它们广泛分 布于抗原提呈细胞的表面，且能直接刺激T。细胞，使之增生并产生 大量淋巴因子。动物实验表明，事先用Ia抗体加补体处理供鼠的刺 激细胞，以除去带II类抗原的细胞后，体外混合淋巴细胞反应中的 增殖反应和杀伤效应都明显减弱或消失。基于正常人黑素细胞体外 纯培养系统成功建立，以及白癜风患者淋巴细胞转化试验、E花环 试验、结核菌素试验与植物血凝素皮肤试验等均反应低下，表明有 细胞免疫异常，可能有利于异体黑素细胞的移植。p～ 第一部分黑素细胞的培养及生物学鉴定 目的对体外培养的黑素细胞的生物学特性进行了鉴定。{方法采 用特殊染色即多巴染色和脱黑素染色、免疫组化方法以及透射电镜 技术对经含TPA培养液培养的黑素细胞的形态、结构和功能进行观 察，确定树枝状细胞为黑素细胞。结果多巴染色证实黑素细胞的多 巴酶功能正常，脱黑素染色从另一侧面证实细胞内的黑素是真正的 细胞无间变和恶变，保持正常的生物学特性；电镜结果发现黑素细 胞内与合成功能有关的细胞器非常丰富，如核糖体、内质网、线粒 体和高尔基复合体等，含有不同阶段的黑素小体，黑素小体的分布、 输送均正常j7结论体外培养的黑素细胞的结构和功能保持着正常的 生物学特性。 第二部分黑素细胞同种异体移植的细胞水平研究 {目的从体外实验来研究排斥反应的可能性。由于在排斥免疫反 应中，HLA．II类抗原，特别是HLA—DR抗原是一强有力的免疫原， 我们对正常人黑素细胞表面HLA．DR抗原的表达情况进行了研究。 黑素细胞与同种异体淋巴细胞混合培养，可作为同种异体黑素细胞 移植的体外模型。方法采用免疫组化的方法测定黑素细胞表面 定淋巴细胞的转化增殖率，并用透射电镜观察混合培养后黑素细胞 的超微结构。结果发现正常人黑素细胞在体内不表达HLA—DR抗 原，体外培养的黑素细胞在含有TPA的培养液中，在传代后2周检 抗原失表达。生长在不舍TPA的培养液中的黑素细胞在短期和长期 培养后检测HLA．DR抗原的表达均不表达。黑素细胞对同种异体淋 巴细胞的转化增殖率与ConA刺激淋巴细胞转化增殖的阳性对照比 较，结果显示黑素细胞的促淋巴细胞转化增殖的特异性抗原作用较 弱。进一步比较黑素细胞对不同病期白癜凤患者的淋巴细胞的影响， 发现黑素细胞对活动期白癜风患者的淋巴细胞的刺激作用相对较 强，而稳定期患者和正常人对照组结果无显著性差异。同时电镜结 果显示同种异体的淋巴细胞对黑素细胞无明显损伤，黑素细胞经混 合培养后，细胞的形态完整，黑素合成功能正常，胞体和树突无损， 伤。细胞内细胞器丰富，胞浆内可见大量的不同阶段黑素小体。y结 论正常人黑素细胞不表达移植抗原HLA。DR，黑素细胞的促淋乜细 胞转化增殖的特异性抗原作用较弱。同种异体淋巴细胞对黑素细胞 超微结构无破坏作用。在进行同种异体移植时最好选择稳定期患者。 第三部分黑素细胞同种异体移植的实验动物研究 ． 目的利用动物实验从体内观察排斥免疫反应的情况。k方法将 取自黑色的C57BL／6的无毛红皮3天小鼠的黑素细胞经体外培养 后，移植给白色的昆明小