七氟烷后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期神经学预后和机制.pdfVIP

  七氟烷后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠 远期神经学预后及机制 中 文 摘 要 目的：本研究旨在构建缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型，探讨七氟烷后处 理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠是否存在远期神经保护效应；在此基础上，结合 缺氧缺血性脑损伤的病理生理特点等，进一步探讨该效应是否通过 PI3K/Akt 信 号通路转导，阻断线粒体渗透性转换而实现。 方法：通过Rice法建立7 日龄（P7 ）新生Sprague-Dawley (SD)大鼠HIBD模 型，随机分为10组（n=12 ）：假手术组（Sham）：建模时暴露左颈总动脉后只挂 线不结扎，未予缺氧及七氟烷处理；对照组(HI/Control)：即缺氧缺血模型组，未 予七氟烷处理；七氟烷后处理组(HI+Sev) ：将HIBD大鼠放入2.5%七氟烷小室中 （30%O2+70%N2 ）30min 处理；侧脑室注射LY294002 联合七氟烷后处理组 (HI+Sev+ LY) ；侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组(HI+Sev+L-N) ；侧脑室 注射 SB216763 联合七氟烷后处理组 (HI+Sev+SB) ；侧脑室注射苍术苷 （atractyloside Atr ）组(HI+Atr) ；侧脑室注射Atr 联合七氟烷后处理组 (HI+Sev+Atr) ；侧脑室注射环孢霉素A （cyclosporin A CsA ）组(HI+CsA) ；侧脑 室注射CsA联合七氟烷后处理组(HI+Sev+CsA) ；各组均于模型建立（或假手术） 后复氧前5min侧脑室注射相应药物或生理盐水。所有干预于5h 内完成，同温空气 中待醒后，放回原笼，常温喂养。P15-P29行平衡实验、P21-P27行悬吊实验， P30-P35行新物体识别实验，P37-P42行Morris水迷宫实验，观测各组大鼠感觉运 动功能及学习记忆功能；水迷宫实验结束后处死，以4 ％多聚甲醛灌流取脑，行 脑形态组织学测评，取出双侧大脑，观察、称重，分离左侧海马行病理切片（HE 染色），观察、计数海马CA1区、CA3区椎体层存活神经元，反映左侧大脑组织 的损伤程度；另取SD大鼠120只，随机分为10组（n=12 ），同法建模干预，24h后 处死，迅速分离左脑海马，Western- bloting法检测海马Akt 、p-Akt 、eNOS、p-eNOS 、 GSK-3β、p-GSK-3β表达，分光光度法检测线粒体渗透性转换。 5   结果： （1） 1）悬吊实验：各组大鼠悬吊时间无显著差异（F=0.430，P=0.916 ） 2 ）平衡实验：与对照组比较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素 A 及环孢霉 素 A 联合七氟烷后处理组实验评分升高（P0.01 ），而单纯苍术苷及苍术苷联 合七氟烷后处理组实验评分无显著差异（P0.05 ）；与七氟烷后处理组比较，侧 脑室注射 LY294002 联合七氟烷后处理组、侧脑室注射 L-NAME 联合七氟烷后 处理组、侧脑室注射 SB216763 联合七氟烷后处理组以及单纯苍术苷和苍术苷联 合七氟烷后处理组实验评分明显下降（P0.01 ），而环孢霉素A 联合七氟烷后处 理组实验评分无显著差异（P0.05 ）。 3 ）新物体识别实验：第0h、3h、24h 识别系数，与对照组比较，七氟烷后 处理、单纯环孢霉素 A 及环孢霉素 A 联合七氟烷后处理组增高（P0.01 ），而 单纯苍术苷及苍术苷联合七氟烷后处理组无显著差异（P0.05 ）；与七氟烷后处 理组比较，侧脑室注射 LY294002 联合七氟烷后处理组、侧脑室注射 L-NAME 联合七氟烷后处理组、侧脑室注射 SB216763 联合七氟烷后处理组以及单纯苍术 苷和苍术苷联合七氟烷后处理组明显下降（P0.05 ），而环孢霉素A 联合七氟烷 后处理组无显著差异（P0.05 ）； 4 ）Morris 水迷宫实验：① 定位航行实验：平均逃逸潜伏期，与对照组比 较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素 A 及环孢霉素 A 联合七氟烷后处理组明显缩 短（P0