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发酵产物的提取与精制 概述 发酵液的预处理及菌体分离 发酵产物的提取和精制 发酵产品的成品加工 微生物经过适当条件培养后，菌体大量繁殖，合成并积累了相当浓度的代谢产物，这时便可以进入下游工程。发酵液的下游加工是指从发酵产物中分离、纯化产品的过程。它是利用产物和杂质的物理化学性质不同，提取产物或者从系统中去除杂质的操作。 概述 发酵液的一般特性 微生物发酵生产各种发酵产品时，由于多用原料、菌种、工艺过程等的不同，所以预处理、提取、精制方法也有差异。发酵产物大多存在于发酵液中，少数存在于菌体内。要分离提纯发酵产物，首先要针对发酵液的特性进行预处理。 发酵液一般具有以下特性： 发酵液中发酵产物浓度较低，属于稀水溶液系统。 发酵液中成分复杂，除发酵产物外，还含有微生物细胞碎片、代谢产物、残留的培养基 、无机盐等。特别是少量的代谢产物，结构特性与发酵产物相近，给分离提纯带来困难。 发酵液中还含有色素、热源物质、毒性物质等有机杂质，影响发酵产品的质量。 发酵产物稳定性低，对热、酸、碱、有机溶剂、酶、机械力等敏感，在不适宜的条件下容易失活或分解。 提取和精制过程 提取和精制是为了从发酵液中获得高纯度的、符合质量标准要求的发酵产品。由于发酵产物存在形式不同，用途各异，而且对产品的质量有不同的要求，所以分离纯化步骤可以有不同的组合，但大多数产品的下游工程过程，常常按照生产过程的顺序分为四个步骤，（如P76图6-1）即发酵液的预处理和菌体分离、提取、精制、成品加工。 发酵液的预处理和菌体分离是采用凝聚和絮凝等技术，加速固-液两相分离，提高过滤速度。发酵产品如果是胞内产物，首先要进行细胞破碎，再分离细胞。 初步纯化即提取，主要是除去与目标产物性质有很大差异的物质，使产物浓缩以及产品质量提高。常采用方法有沉淀、吸附、萃取等。 高度纯化即精制，采用对产品有高度选择性的分离技术，除去与产物理化性质相近的杂质。典型的方法有层析、离子交换等。 成品加工是为了获得质量合格的产品，常用浓缩、结晶、干燥等技术方法。 发酵液的预处理及菌体分离 发酵液的预处理与菌体分离是发酵液下游加工的第一步操作。预处理的目的是改善发酵液的性质，去除部分可溶性杂质，分离菌体和其他悬浮颗粒，以利于提取和精制工序的操作。在预处理中，常用酸化、加热、加絮凝剂等方法，而菌体分离则常用过滤、离心等方法，如果目的产物存在于细胞内，则需要收集菌体或细胞，并对细胞进行破碎。 发酵液的预处理 发酵液中杂质很多，成份复杂。有些杂质直接影响产品质量和收得率，对提取和精制也有很大影响，其中对纯化影响最大的是高价无机离子和杂质蛋白等。采用离子交换法提取时，高价无机离子会影响树脂对生化物质的交换容量。杂质蛋白的存在，不仅在离子交换法和吸附法提取时，降低树脂的交换容量和吸附能力，而且在溶剂萃取时会发生乳化，影响两相分离。此外，在常规过滤和膜过滤时，易使过滤介质阻塞，影响过滤速率，或者使膜受到污染，因此在发酵液预处理时，采用适当方法去除这些杂质，有利于提取和精制的顺利进行。 高价无机离子的去除 发酵液中主要的无机离子有Ca2+、Mg2+、Fe3+等。 钙离子的去除，通常使用草酸。草酸为弱酸，对发酵产物破坏作用较小。草酸溶解度较小，不适合用量较大的场所。若Ca2+浓度较高，可使用草酸的可溶性盐，如草酸钙。草酸与Ca2+形成的草酸钙沉淀还能促使蛋白质凝固，改善发酵液的过滤性能。 由于草酸镁的溶解度较大，因而草酸不能除尽Mg2+。除Mg2+可加入单聚磷酸钠，它和Mg2+形成可溶性络合物，可消除对离子交换的影响。其反应式如下： 铁离子的去除可用黄血盐。黄血盐与铁离子形成普鲁士蓝沉淀。其反应式如下： 杂蛋白的去除 沉淀法 蛋白质是两性物质，在酸性溶液中带正电荷，在碱性溶液中带负电荷。大多数蛋白质的等电点在酸性范围（pH4.0～5.5），当蛋白质处于等电点时，极易沉淀析出。但仅靠调pH不能使大部分蛋白质沉淀，还必须与其他方法共用。在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、过氯酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中，能与Ag+、Cu2+、Zn2+等阳离子形成沉淀。或者加入碱金属中性盐作为脱水剂，破坏蛋白质分子的水化层，使蛋白质沉淀。 变性法 蛋白质变性后，溶解度降低直至沉淀。使蛋白质变性的方法很多，最常用的是加热法。它是在目的产物耐热性允许的氛围内，采用加热处理发酵液的方法。加热不仅可以达到去除杂蛋白质的目的，还能降低发酵液黏度。提高过滤速率。使蛋白质变性的其他方法还有大幅调节pH、加有机溶剂（如乙醇、丙酮）或表面活性剂等。变性法也有一定的局限性，如加热法只适合对热较稳定的目的产物，过酸过碱可能会导致某些产物失活。 吸附法 利用某些吸附剂或沉淀剂的吸附作用去除杂蛋白质。例如在枯草芽孢杆菌发酵液中，常加入氯化钙和磷酸氢二钠