利用基因敲除小鼠探究Mxi1抑制系膜增殖的新机制.pdf

中文摘要 中文摘要 背景：系膜增生性。肾小球肾炎(IgA肾病和非IgA系膜增生性肾炎)是我国最 常见的慢性肾脏病，是导致终末期肾脏病的主要病因。研究系膜增殖的分子机 制，探讨有效的治疗措施，具有非常重要的意义。我们的前期研究发现，影响 系膜细胞增殖的因子(包括增殖促进因子和增殖抑制因子)在系膜增生性‘肾炎 interactor 的发病过程中起重要作用，其中MAX作用因子1(MAX1，Mxil)在 抗．Thyl肾炎模型的系膜增殖期表达水平明显降低，在增殖恢复期表达水平又逐 渐回升，提示该基因在系膜增生性肾炎的病理过程中发挥作用。 目的：本课题以Mxil为切入点，研究Mxil基因敲除在小鼠体内对系膜细胞增 殖水平及肾小球蛋白质表达谱的影响，利用Mxil基因敲除鼠建立系膜增生性肾 炎模型观察其对模型病理过程的影响，并在体外实验中证实其作用，以明确Mxil 是否是一种系膜增殖抑制因子及其是通过何种机制发挥系膜增殖抑制作用的。 组织病理变化并计数肾小球内有核细胞数，PCNA免疫组化及Westernblot观察 细胞增殖情况，Western 与Mxil以小鼠肾小球蛋白质表达谱的差异，并对部分增殖相关蛋白质的表达进 行验证；利用Mxil卅与Mxil士小鼠，以尾静脉注射竹叶青蛇毒素(3．5 mg／kg) 建立系膜增生性肾炎模型，PAS染色观察肾组织病理变化并进行病理评分， PCNA免疫组化观察细胞增殖情况，Western 调控体外培养的系膜细胞Mxil的表达水平，CCK．8法检测细胞增殖水平，流式 细胞技术检测细胞周期进程，Westernblot检测ERKl／2通路分子的表达，并观 察ERKl／2通路特异性抑制剂U0126对Mxil调控系膜细胞增殖作用的影响。 轻．中度系膜细胞增殖。与Mxil刊+小鼠相比，Mxil以小鼠肾小球内有核细胞数略 中文摘要 2D．LC／MS检测共得到差异表达蛋白质129个，其中在Mxil乒小鼠。肾小球中表达 上调的蛋白质65个，下调的蛋白质64个。对差异表达蛋白质中可能与细胞增 H2B、catalase、 blot验证，变化趋势与2D．LC／MS结果基本一 Slc5a8、Skpl的表达进行Western Mxil斗小鼠的存活率低于Mxil+／+d、鼠。肾脏病理显示在造模后第l、3天，小鼠 出现肾小球系膜溶解病变，造模后第-7天，Mxil叫+小鼠除系膜细胞增殖及系膜 基质增多外，其他病变基本消失，Mxil士小鼠系膜区呈弥漫显著增殖，并有部分 肾小球出现节段硬化、球囊粘连等病变，病理评分明显加重。各时间点模型小 的表达明显升高，且各时间点Mxil士小鼠P．ERKl／2的表达均高于Mxil州+小鼠。 (4)与对照转染组相比，Mxil质粒转染可明显降低体外培养的系膜细胞的增殖 能力，使处于S期的细胞明显减少，并显著抑制ERKl／2通路分子P．ERKl／2、 ERKl／2、P．MEK、MEK、CyclinD1、Cyclin 转染可引起相反的结果。U0126可抑制siMxil转染引起的系膜细胞增殖水平升 基因敲除可使肾小球蛋白质表达谱发生明显变化，使ERKl／2蛋白质表达水平升 高；(3)与野生型小鼠相比，利用Mxil基因敲除鼠建立系膜增生性肾炎模型后， 小鼠系膜细胞增殖程度更高，病理损伤加重；(4)在体外培养的系膜细胞中过 表达Mxil可抑制细胞增殖，同时抑制ERKl／2通路分子的表达，低表达Mxil 可引起相反的结果，而ERKl／2通路抑制剂则可拮抗Mxil低表达引起的系膜细 胞增殖水平升高。综上所述，本课题通过体内及体外实验证实Mxil是一种系膜 增殖抑制因子，其抑制系膜细胞增殖的作用与对ERKl／2通路的抑制有关。 关键词： MAX作用因子1，系膜增生性肾炎，基因敲除，细胞增殖，ERKl／2通路 II Abstract