实验九食品中维生素C含量的测定.docxVIP

实验九 食品中维生素C含量的测定1.实验目的学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定食品材料中维生素C含量的原理和方法。2.实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。3.仪器及材料3.1仪器容量瓶、锥形瓶、微量滴定管、洗耳球3.2试剂（1）1%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水；2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水。（2）维生素C标准储备液：准确称取20mg维生素C溶于1%草酸溶液中，移入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混匀，冰箱中保存。（3）维生素C标准使用液（0.02648mg/ml）：吸取维生素C贮备液5ml，用1%草酸溶液稀释至50ml。标定：准确吸取上述维生素C标准使用液25.0mL于50mL锥形瓶中，加入0.5mL 60g/L碘化钾溶液，3～5滴淀粉指示剂 (10g/L)，混匀后用0.0010mol/L标准碘酸钾溶液滴定至淡蓝色（极淡蓝色）为终点。 重复操作三次，取平均值计算L-抗坏血酸的浓度。式中：C—维生素C的浓度，mg/ mL；V1—滴定时消耗1.67×10-4mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL；V2—吸取维生素C标准使用液的体积，mL；0.088—1.00mL碘酸钾标准溶液 (1.67×10-4mol/L) 相当的维生素C的量，mg。（4）2，6-二氯酚靛酚液：称取2，6-二氯酚靛酚50mg，溶解并定容至250ml（棕色瓶），冷藏。标定：吸取已知浓度的维生素C标准使用溶液5.00mL于50mL锥形瓶中，加5mL10g/L草酸溶液，用2.6—二氯靛酚溶液滴定至呈粉红色，且15s不褪色即为终点。同时，另取 5mL10g/L草酸溶液做空白试验。重复操作三次，取平均值计算L-抗坏血酸的浓度。式中： T —每mL 2，6—二氯靛酚溶液相当于维生素C的毫克数； C—维生素C标准使用液的浓度，mg/ mL；V—标定时吸取维生素C标准使用液的体积，mL；V1—滴定抗坏血酸溶液消耗2，6—二氯靛酚的溶液的体积，mL。V2—滴定空白所用2，6－二氯靛酚溶液的体积, mL。（5）碘酸钾溶液（0.000167mol/L）：精确称取碘酸钾0.3567g，定容至100ml，吸取1ml，稀释至100ml。（6）1%淀粉溶液（7）6%碘化钾溶液3.3材料橘子4.实验过程4.1实验步骤（1）水洗干净整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。每一样品称取2.00-5.00g，放入研钵中，加入2％草酸一起研磨成匀浆，提取液通过2层纱布过滤到100ml 容量瓶中，然后用2％HCl冲洗研钵及纱布3－4次，最后用1％草酸稀释定容至刻度线。（2）如果提取液含有色素，则倒入锥形瓶内加入1匙活性碳，充分振荡5分钟，滤纸过滤，活性碳吸附生物样品中的色素，有利于终点的观察。（3）取三角锥形瓶3个，各加脱色的提取液10或20ml，用2,6－二氯酚靛酚溶液滴定，直至出现微红色30秒不退色为终点。记录两次滴定的毫升数，取平均值。滴定必须迅速不要超过2分钟，因为在实验条件下，一些非Vc的还原物质其还原作用较迟缓，快速滴定可以避免或减少它们的影响。平行3次，空白3次。4.2注意事项（1）样品中某些杂质也能还原2，6-二氯酚靛酚，但速率均较抗坏血酸慢，故终点以淡色存在30s为准。（2）维生素C还可以用2%草酸溶液来提取，2%草酸和偏磷酸同样具有抑制抗坏血酸氧化酶的功效。（3）若样品中含有大量Fe2+,可以还原2，6-二氯酚靛酚，用草酸为提取液，则Fe2+不会很快与染料起作用。5.实验结果及分析5.1数据记录表实验组别滴定过程试样体积/ml滴定起点/ml滴定终点/ml滴定体积/ml样品12.304.121.8210.0024.126.041.9210.0036.0