去甲基化制剂对肝癌细胞SMMC-7721生长和RUNX3基因表达的影响.pdfVIP

中文摘要 去甲基化制剂对肝癌细胞SMMC．7721生长及 RUNX3基因表达的影响 硕士研究生：何艳新 导师：刘超 郑州大学第二附属医院普外科 河南郑州450002 中文摘要 研究背景 肝细胞癌在我国是常见的恶性肿瘤之一，是原发性肝癌的主要类型之一。 然而其发病机制尚未完全阐明，肝癌的发生发展是一个涉及多基因的变化、多 因素、多步骤的连续过程。近年来研究发现，表观遗传学的改变在肝癌的发生、 发展过程中扮演着重要的角色。表观遗传的现象很多，已知的有DNA甲基化 (DNArnethylation)，基因组印记(genomic effects)，基因沉默(genesilencing)，核仁显性，休眠转座子激活和RNA编辑 (RNA 致该基因的表达沉默，成为近些年来研究肝癌相关发生发展机制及治疗的热点 之一。 transcription 5-Aza．de)是一种核苷酸类甲基转移酶抑制剂，也可以对DNA甲基转移酶进行 特异性抑制，使DNA甲基化程度下降，进而逆转因甲基化而沉默的基因重新开 始表达。在肝癌组织中RUNX3基因CpG岛甲基化的相关研究已有不少报道， 多见。 中文摘要 目的 甲基化状态、mRNA表达水平及肝癌细胞生长周期的影响。 材料与方法 肝癌细胞SMMC．7721由河南省肿瘤医院中心实验室所赠，选择在 m1)中培养， RPMI．1640培养液(10％胎牛血清、100U／ml青霉素、100 meg 培养液置于37(2，饱和湿度的细胞培养箱中。每2到3天换液传代1次。并分 为对照组(不进行加药处理)和5-Aza-dC处理组。 1 不同浓度的5-Aza．dC对肝癌细胞SMMC．7721RUNX3基因启动子区域 甲基化状态的影响： 3．51上mol／L浓度的5-Aza—dC培 分别以0．5pmol／L、1．5“mol／L、4．5rtmol／L、1 72h，提取细胞DNA，参照甲基化特异性聚合酶链式反应 养肝癌细胞SMMC．7721 chain reaction，MSP)技术，分别设计甲基化和 (methylation-specificpolymerase 非甲基化引物，检测两组肝癌细胞RUNX3基因启动子区域的甲基化状态。 RUNX3基因mRNA的 2不同浓度的5．Aza-dC对肝癌细胞SMMC．7721 作用： 养肝癌细胞SMMC．7721 72h，提取细胞RNA，应用RT-PCR(Real—timePCR)技 术检测两组肝癌细胞SMMC．7721中RUNX3mRNA表达的影响。 3不同浓度的5-Aza-dC对肝癌细胞SMMC．7721细胞周期的影响： 分别以0．5／amol／L、1．5pmol／L、4．5pmol／L、13．5pmol／L浓度的5-Aza—dC培 养肝癌细胞SMMC．772172h，收集细胞，使用流式细胞术(FCM)检测两组肝 癌细胞SMMC．7721细胞周期的影响。 4统计学处理：采用SPSSl8．0统计软件对数据进行分析，结果以均数士标 准差(孑士s)表示，以p0．05为差异有统计学意义。 结果 1 不同浓度的5-Aza．dC对肝癌细胞SMMC．7721RUNX3基因启动子区域 甲基化状态的影响： RUNX3基因启动子区域存在