庆大霉素鼓室内注射后在脑干前庭与听觉中枢的分布及损伤的研究.pdfVIP

复旦大学博士论文 庆大霉素鼓室内注射后在脑干前庭及听觉中枢的分 布和损伤的研究 中文摘要 目的1)探索庆大霉素鼓室内注射后在脑干前庭中枢是否有分布及其分布特点 2)探索鼓室内注射庆大霉素后在脑干听觉中枢是否有分布及其分布特点3)鼓 室内注射庆大霉素后对于脑干前庭及听觉核团的影响 方法1)本实验选用正常成年白化豚鼠作为研究对象，经鼓室注射30mg／ml 庆大霉素作为动物模型；经卵圆窗注射HRP逆行示踪剂并结合既往文献，定位 豚鼠前庭传出神经元；2)造模成功后，在不同时间点处死；行免疫组织化学、 免疫荧光染色组，用多聚甲醛进行心脏灌注固定、取材，行冰冻切片，获得连 续脑片；行透射电镜组，处死后用多聚甲醛和戊二醛混合液进行心脏灌注固定、 取材，继而行振动切片；3)通过甲苯胺蓝染色标记脑干不同核团的相对位置， 通过DAB染色，识别豚鼠前庭传出神经元；通过免疫组织化学单标、三标技术 III tubulin标记神经元，DAPI标记细 (anti。gentamicin标记庆大霉素，anti．beta 胞核)，了解庆大霉素的分布情况；4)荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜、 透射电镜下观察并拍照，Adobe CS2处理图片，庆大霉素阳性细胞计 photoshop 数，并用SPSS16．0进行统计分析。 结果1)鼓室内注射后，庆大霉素在前庭传出神经元、上橄榄核、耳蜗核均有 染色，在前庭神经节及前庭复合核无庆大霉素分布。在前庭传出神经元和上橄 榄核，庆大霉素在给药侧及给药对侧均有染色，主要分布于神经元胞浆及其突 起，神经核内未见庆大霉素染色。在耳蜗核，仅给药侧出现明显庆大霉素阳性 标记，对侧耳蜗核未及庆大霉素染色；主要分布于神经元胞体以外，神经元胞 体内未见任何阳性标记；背侧耳蜗核较腹侧耳蜗核分布强。2)庆大霉素给药后 24小时，前庭传出神经元即有庆大霉素染色。至3天达到高峰，7天时仍保持 4 复旦大学博士论文 等同水平，至14天时庆大霉素阳性细胞数明显减少，至30天时进一步减少。3) 背侧耳蜗核内耳蜗神经纤维、进入脑干的前庭神经纤维以及上橄榄核下行传出 神经通路全程均可及庆大霉素标记阳性。4)鼓室内注射庆大霉素3天后，前庭 I型、II型毛细胞的传入及传出突触均可见显著的空泡样变性；支配II型毛细 胞的传入及传出突触发生空泡样变性后，无法区分。5)给药后3天，前庭传出 神经核内的有髓神经纤维髓鞘板层松解，原浆型星形胶质细胞严重水肿；神经 元突起出现显著的空泡样变性，内容物溶解。给药后30天，有髓神经髓鞘板层 排列紧凑整齐；神经元胞质及核明显肿胀，电子密度降低，核内染色质缺失，胞 浆内线粒体可见少许小泡。给药后3天，耳蜗核内可见有髓神经纤维髓鞘板层 广泛松解，而神经元胞浆、树突、细胞核未见明显异常；给药后30天，有髓神 经纤维髓鞘板层排列紧凑整齐，另外可见神经元外包绕的星形胶质细胞突起明 显水肿。给药后3天，上橄榄核内有髓神经纤维髓鞘板层松解，树突内空泡样 变性、胞浆内出现较多初级溶酶体；给药后30天，有髓神经髓鞘板层排列紧凑 整齐，星形胶质细胞胞质、突起及核明显肿胀，核团内可见暗细胞。 结论1)鼓室内注射庆大霉素后，不仅分布于耳蜗、前庭外周器官，相应的中 枢核团也有分布，且保留庆大霉素一段时间；逆行性轴突运输是庆大霉素进入 前庭传出神经元、上橄榄核的可能方式。顺行性轴突运输是庆大霉素进入耳蜗 核的可能方式。2)前庭复合核无庆大霉素分布，可能原因包括：前庭神经节基 本无庆大霉素分布，以及跨突触转运庆大霉素较不容易。3)庆大霉素对分布阳 性的核团造成直接损伤，对传出神经核团的损伤较传入核团严重。给药后3天， 传出神经核团神经纤维髓鞘板层松解、神经元突起空泡样变性、原浆型星形胶 质细胞水肿；至30天，髓鞘病变可逆性恢复，但个别神经元发生严重肿胀， 甚至凋亡；给药后，耳蜗核出现显著的神经纤维髓鞘变性，但神经元未见