基酸的薄层层析实验报告.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： XXX 学 号： XXXXXX 专业年级： 临床八年制 __ 组 别： 第二实验室 实验名称 (Title of Experimetn) 氨基酸的薄层层析 实验日期 (Date of Experiment) XX 实验地点(Lab No.) 第二实验室 合作者(Partner) XXX 指导老师(Instructor) XXXX 总分 (Total Score) 教师签名(Signature) 批改日期 (Date) 一、实验预习 1.0 实验目的 掌握薄层层析法的一般原理。 掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。 掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。 1.1 实验原理 1.1.1薄层层析原理：（是色谱分析技术的一种） 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来） 1.1.2. 氨基酸与茚三酮的显色反应 茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成蓝紫色化合物而使氨基酸斑点显色。 1.1.3基于相对迁移率Rf值判定混合氨基酸组分 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。 即： = 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。 1.2 实验材料 1.2.1实验样品 ① 丙氨酸：称取丙氨酸溶于90%异丙醇溶液至。 ②精氨酸：称取精氨酸溶于90%异丙醇溶液至。 ③甘氨酸：称取甘氨酸溶于90%异丙醇溶液至。 ④混合氨基酸溶液： 将丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混 合溶液。（上述溶液已由老师提前制备完成） 1.2.2实验试剂 ①吸附剂：硅胶G(C.P.)。 ②粘合剂：羟甲基纤维素钠（CMCNa）：取羟甲基纤维素钠溶于 蒸馏水中，煮沸，静置冷却，弃沉淀，去上清备用。 ③展开溶剂：按80:10:10（V/V/V）混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水，临用前 配制。 ④茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.）溶于无水丙酮（A.R.）至。 ⑤展层-显色剂：按照10:1比例（V/V）混合展开剂和茚三酮溶液。 1.2.3实验主要仪器和器材 ①层析板（6cm15cm） 步骤 操作 （1）制版 ①调浆：利用普通天平，粗称取3g硅胶，加入羟甲基纤维素钠，调成均匀的糊状 ②涂布：取洁净的干燥玻璃板 ③干燥：将玻璃板水平放置，室温下放置0.5h，自然晾干 ④活化：70烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。 （2）点样 ①标记：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距1cm。 ②点样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。自然晾干后，必要时可再重复点一次。 （3）层析 将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，（该实验中超过板长度的即可）取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。 （4）显色 放置在烤箱中用85℃下烘干，即可显出各层斑点。 （5）数据处理 利用小尺子，测量各氨基酸色斑中心至样品原点中心距离和溶液前缘至样品原点中心的距离。计算RF值，从而判断混合液的成分组成。 1.3.3注意事项 ①吸附剂：实际实验要求不高，学生不用考虑。 ②点样：点样的次数依照样品的溶液的浓度而定，样品量太少，有的成分不易显示；样品量太多，易造成斑点过大，互相交叉或拖尾。故：点样后的斑点直径一般为0.2cm。 ③避免污染：切勿用手直接接触薄层板面，必要时戴上手套。 二、实验记录 2.1 实验条件 2.1.1制版过程： 材料：3g的硅胶和羟甲基纤维素钠 （实验室提供试剂，利用普通天平称取硅胶、利用10mL量筒量取CMCNa）并利用小烧杯混合搅拌均匀。 实验时间：约20min 实验技巧：将糊状物倒至洁净玻璃板正中间，形成连续的一条线，并马上开始左右来回晃荡，使糊状混合物向着玻璃板的两边蔓延。在边缘的地方利用晃荡和药匙凃均匀后，再晃荡几次，使得全部糊状物在玻璃板上均匀的形成涂层。 实验