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慢病毒介导的 HER2-shRNA 对卵巢癌 SKOV3 细胞化疗敏感性的体内外研究 中文摘要 I 慢病毒介导的 HER2-shRNA 对卵巢癌 SKOV3 细胞化疗敏感性的体内外研究 中文摘要 I 慢病毒介导的 HER2-shRNA 对卵巢癌 SKOV3 细胞化疗敏感性的体内外研究 中文摘要 慢病毒介导的HER2-shRNA 对卵巢癌SKOV3 细胞化疗 敏感性的体内外研究 中文摘要 目 的: 探讨 HER2-短发夹状（sh ）RNA（HER2-short hairpin RNA ，HER2-shRNA ） 慢病毒载体体外感染人卵巢癌细胞 SKOV3 后，建立稳定表达细胞株，研究其生物学 行为的变化及其对顺铂化疗敏感性的变化，并通过体内移植瘤实验研究靶向沉默人表 皮生长因子受体 2 （HER2 ）基因后对卵巢癌化疗敏感性的影响，探索 RNA 干扰 （RNA interference，RNAi ）技术在卵巢癌基因治疗方面的可行性。 方 法:利用本室保存的靶向 HER2 基因 HER2-shRNA 慢病毒表达载体和阴性对 照序列慢病毒载体感染人卵巢癌细胞 SKOV3；利用嘌呤霉素加压筛选，建立稳定表 达 HER2-shRNA 的 SKOV3 细胞株（KD ）及阴性对照细胞株（NC ) ，组成KD 组和 NC 组，以未感染的 SKOV3 细胞为 CON 组，体外通过 Real time PCR 和 Western blot 技术检测 3 组细胞的 HER2 mRNA 及蛋白的表达；Transwell 细胞侵袭实验检测 3 组 细胞的侵袭能力；CCK-8 法测定 3 组细胞对不同顺铂浓度（0、0.312、0.625、1.25、 2.5 、5、10、20 、40μg/mL ）的化疗敏感性的变化；将各实验组细胞接种于裸鼠，经 尾静脉注射顺铂注射液（DDP ）治疗后，检测各组裸鼠移植瘤的成瘤率、成瘤时间、 瘤体大小、瘤体重量；免疫组化测定各实验组 HER2 蛋白表达。 结 果:经嘌呤霉素加压筛选获得稳定表达有效干扰序列和阴性对照序列的实验 细胞株，通过荧光显微镜观察及流式细胞学检测，NC 组和KD组的荧光表达率均在 96% 以上。Real time PCR结果显示CON 、NC 、KD组细胞的HER2 mRNA相对含量 （HER2/β-actin ）分别为1.002±0.078、0.956±0.314、0.047±0.016，KD组HER2 mRNA 的含量与CON和NC组相比明显下调，差异有统计学意义（P0.01 ）。Western blot结 果显示CON 组、NC 组及KD 组HER2 蛋白的相对表达量分别为（0.487±0.012 ）、 （0.447±0.021 ）和（0.124±0.013 ），KD组明显低于NC和CON组，差异有统计学意义 （P0.01 ）。Transwell细胞侵袭实验结果显示KD组细胞侵袭能力显著下降。随着顺 铂浓度的增加，三组细胞生长都受到抑制，但KD 组细胞生长速度在顺铂浓度 I 中文摘要 慢病毒介导的HER2-shRNA 对卵巢癌 SKOV3 细胞化疗敏感性的体内外研究 ≧2.5μg/mL时明显较CON组和NC组慢（P0.05 ），CON和NC组细胞两组比较无显著 差异（P0.05 ）。体内动物实验结果显示KD组卵巢癌移植瘤经顺铂治疗后较其他组 平均瘤体体积、瘤体重量明显减小（P0.05 ）；免疫组化结果亦显示KD+DDP组HER2 蛋白的表达明显下调。 结 论:慢病毒介导的 HER2-shRNA 可