(生化课件）1蛋白质的结构与功能.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *  * * * * * * * * * * * * 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 层析 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 蛋白质分离常用的层析方法 利用蛋白质颗粒沉降行为不同可进行超速离心分离 谢谢大家 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 由2个亚基组成的蛋白质四级结构中，若亚基分子结构相同，称之为同二聚体(homodimer)，若亚基分子结构不同，则称之为异二聚体(heterodimer)。 血红蛋白的四级结构 五、蛋白质的分类 根据蛋白质组成成分: 单纯蛋白质 结合蛋白质 = 蛋白质部分 + 非蛋白质部分 根据蛋白质形状: 纤维状蛋白质 球状蛋白质 蛋白质结构与功能的关系 The Relation of Structure and Function of Protein 第三节 （一）一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础 牛核糖核酸酶的一级结构 二硫键 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 （二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能 胰岛素 氨基酸残基序号 A5 A6 A10 B30 人 Thr Ser Ile Thr 猪 Thr Ser Ile Ala 狗 Thr Ser Ile Ala 兔 Thr Gly Ile Ser 牛 Ala Gly Val Ala 羊 Ala Ser Val Ala 马 Thr Ser Ile Ala （三）氨基酸序列提供重要的生物进化信息 一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色素(cytochrome C)，比较它们的一级结构，物种越接近，一级结构越类似，空间构象和功能越类似。 可以帮助了解物种进化间的关系。 （四）蛋白质的关键氨基酸序列改变可引起疾病 例：镰刀形红细胞贫血 二、蛋白质的功能依赖特定空间结构 （一）血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似，均以血红素为辅基 肌红蛋白(Mb) 血红蛋白(Hb) （二）血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与氧结合 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity) 如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperativity) 别构效应(allosteric effect) 蛋白质空间结构的改变导致功能的变化，称为别构效应。 对于Hb/O2而言，O2是别构剂或效应剂，Hb被称为别构蛋白。 别构效应具有普遍的生物学意义，如配体与受体的结合也存在变构效应。 （三）蛋白质构象改变可引起疾病 蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。 第四节 蛋白质的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Protein 一、蛋白质具有两性电离的性质 蛋白质的等电点（isoelectric point，pI) 二、蛋白质具有胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。 颗粒表面电荷 水化膜 蛋白质胶体稳定的因素: 盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及PH值均不同。 三、蛋白质空间结构破坏而引起变性 在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，（也即有序的空间结构变成无序的空间结构，）从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。 蛋白质的变性(denaturation) 造成变性的因素: 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 变性的本质: ——破坏非共价键和二硫