皮瓣缺血再灌注损伤对皮瓣细胞凋亡和相关凋亡基因FAS表达的影响.pdf

IrrlIrlIlr／Ill IrllfflIJIIJrIIIrlfl 珊Ill Y190 1．6lli[12IIl‘llr2l 目 录 中文摘要………………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文皮瓣缺血再灌注损伤对皮瓣细胞凋亡及相关凋亡基因FAS表 达的影响 前言………………………………………………………………………8日lJ舌………………………………………………………………………8 材料与方法………………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………．．15 附图……………………………………………………………………。17 附表………………………………………………………………………23 讨论……………………………………………………………………．．24 结论……………………………………………………………………。30 参考文献………………………………………………………………．．31 综述皮瓣缺血再灌注损伤相关凋亡基因FAS的研究进展……………．．33 致谢…………………………………………………………………………．．40 个人简历……………………………………………………………………．．41 中文摘要 皮瓣缺血再灌注损伤对皮瓣细胞凋亡及相关 凋亡基因FAS表达的影响 摘 要 目的：观察皮瓣组织发生缺血再灌注后形态学的变化；对比研究皮瓣 组织缺血再灌注组与非缺血再灌注组细胞凋亡的变化规律；对比研究缺血 再灌注组与非缺血再灌注组的皮瓣组织不同时间点Fas蛋白的表达情况； 对比研究缺血再灌注组与非缺血再灌注组的皮瓣组织在不同时间点相关 凋亡基因Fas的表达情况。以阐明Fas基因在皮瓣缺血再灌注中的作用， 探讨缺血再灌注损伤时细胞凋亡与Fas基因的关系，为从基因水平，防治 皮瓣缺血再灌注损伤，提高皮瓣成活率，提供新思路和理论依据。 方法： l实验动物：雄性健康清洁级WlSTAR大鼠50只，称重、编号。 2动物模型建立：于皮瓣制作前三天，各组大鼠用8％的硫化钠腹部脱毛 醉。麻醉成功后大鼠仰卧位，四肢固定，75％酒精消毒，于右下腹设计一 以腹壁浅血管为蒂的轴形皮瓣，大小约3crux6锄。 3实验动物分组：将大鼠分为两组， (1)非．IR组25只：皮瓣形成后原 位缝合，不做任何处理。时间点的选取以形成皮瓣后8h、9h、14h、。20h、 32h分为五组与实验组形成对照，每组五只大鼠。IR组25只：皮瓣形成 后，微血管夹夹闭腹壁浅动脉发出点近端的股动脉，手术显微镜下观察， 确认血流阻断后，3．O丝线原位缝合皮瓣，切口再次消毒。8h后再次手术 去除血管夹，并经手术显微镜下观察，确认恢复血流，再灌注成功。按去 4取材：非．取组和m组按照各组时间点的要求，分别于皮瓣中间边缘处 取皮瓣组织1．0cmx0．5cm，所取标本中一部分用多聚甲醛迅速固定待做石 蜡切片及免疫组化染色，准备做细胞凋亡和Fas的检测。部分液氮冰冻后， 置冰箱中保存，以备RT—PCR检测。 5检测方法及观测指标 中文摘要 5．1组织学检查：将石蜡切片进行HE染色，观察组织结构改变。 DNA片段检测皮瓣组织不同时间点凋亡细胞，凋亡细胞阳性指数用平均 阳性细胞数与总细胞数的比值表示(AI，AI=凋亡细胞数目／总细胞数目 ×100％)。 5．3Fas基因蛋白表达检测：应用免疫组化(SP)法检测皮瓣组织中凋亡 细胞在术后不同时间点Fas蛋白