硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导的细胞毒性作用的敏感性和机理研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导的细胞毒 性作用的敏感性及机理研究 前言 在欧美国家，前列腺癌是一种非常普遍的男性恶性肿瘤，死亡率在男性疾病 中位居第二位，仅次于肺癌。近年来，随着人们对疾病的认识和诊断技术的不断 发展，亚洲国家的前列腺癌发病率也在提高，且发病年龄正趋于年轻化。对于早 期前列腺癌，放疗和手术治疗是潜在的根治模式。对于晚期的前列腺癌病人，也 可以用去势的方法治疗，这样可以使大于90％的病人病情得到缓解。然而，大多 数这样的前列腺癌患者都会在治疗后l～3年内复发。在这个阶段，前列腺癌不再 是雄激素依赖型的了，而是变成了一种雄激素或者是性激素非依赖或抵抗的前列 腺癌。这种性激素非依赖型的前列腺癌对激素抑制治疗和化疗无效，细胞继续生 长，肿瘤停止退化，病人生存率非常低。所以，急切期待着新的治疗模式的产生。 免疫治疗策略治疗恶性肿瘤是一种很有希望的的治疗模式。其中，NK细胞是 一类能够介导细胞毒性对抗肿瘤细胞和病毒感染的淋巴细胞亚群。它是天然免疫 系统的一个关键组成部分，NK细胞具有各种杀伤途径的组成成分以杀伤靶细胞， 包括释放细胞毒性颗粒、产生细胞因子，而这些细胞因子能够诱导免疫反应，并 能在靶细胞表面连接死亡受体。值得注意的是，NK细胞具有TRAIL和Fas配体 (F淞L)，它们都能在靶细胞上触发凋亡。NK细胞识别靶点是被激活信号和抑制 信号的动态平衡来调节的。抑制性受体主要是杀伤细胞免疫球蛋白样受体 (Killer=cell Immunoglobulin-likerrecptors，KIRs)，可以特异性的和自身细胞表面 的HLA．I类分子结合，从而抑制由活化性受体激发的细胞毒性作用，使自身细胞 免受NK细胞的攻击。尽管存在一个激活性受体，抑制性配体也能够引发一些优 先信号，抑制NK细胞的机能。自体的HLA分子使NK细胞失活是恶性肿瘤细胞 逃逸宿主NK细胞介导的免疫的一个潜在机制。 26S蛋白酶体是一种复杂的酶类，在所有的真核细胞胞核和胞浆中表达，通 过泛素连接来降解靶蛋白。蛋白酶体能够调节细胞内的蛋白水解、清除错配和不 需要的蛋白、控制细胞循环调节蛋白、转录因子、和已确定的抑癌和癌基因的细 胞内水平，对维持内环境的稳定起了重要作用。这些作用使它成为了一种有潜力 的肿瘤治疗靶点。硼替佐米是一种蛋白酶体抑制剂，它曾经被批准用于多发性骨 髓瘤的治疗。现在正被研究作为单药或者与化疗药物联合用于其它癌症的治疗。 蛋白酶体的抑制伴随着减少肿瘤细胞的增殖和增加凋亡。 FAK是一个非受体蛋白酪氨酸激酶，定位于细胞间的连接和粘附位点。它调 节很多细胞功能，如细胞粘附，迁移，扩散和凋亡。FAK的激活和它的下游信号 通路广泛参与了复杂的间质和上皮恶性肿瘤的进展。在很多恶性肿瘤中，FAK的 表达都有所增加，包括结直肠癌、乳腺癌、肉瘤、宫颈癌、前列腺癌、甲状腺癌、 神经细胞瘤和肝细胞癌等。整合素介导了FAK的激活，FAK的Tyr397位点发生 自主磷酸化，从而增强FAK的下游信号通路。通过Tyr-397的自体磷酸化激活的 FAK导致了肿瘤的进展，同时高度参与了肿瘤的迁移和侵袭。因此，FAK在肿瘤 的进展上扮演了一个重要的角色，而且也是抗肿瘤药物治疗的一个重要的分子靶 点。 本课题以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺细 胞株DUl45为模型，研究硼替佐米增强肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性作用， 并探讨其机制。以及硼替佐米对FAK的影响，及其对前列腺癌细胞迁移和侵袭的 作用。为防治前列腺癌提供新思路和新靶点。 材料与方法 一、实验材料 l、细胞株 前列腺癌细胞株DUl45、LNCaP购于中国医学科学院基础医学研究所。 2、组织标本 外周血采集自健康成人志愿者。 2 二、主要研究方法 l、人外周血NK细胞的分离纯化及检测 取健康志愿者外周血20ml，提取外周血单个核细胞(PBMCs)，用NK分离 试剂盒，分离NK细胞，流式细胞术检测NK细胞的纯度；纯化的NK细胞用CD3 上。 2、CCK-$法测定细胞增殖能力和NK细胞的杀伤能力。 3、膜联蛋白(Annexin．V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(flow