硼替佐米对K562细胞株的PTPROt基因的作用.pdfVIP

中文摘要 硼替佐米对K562细胞株的PTPROt基因的影响 摘 要 目的：慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous 骨髓增生性恶性疾病，起源于造血干细胞水平，骨髓内髓系细胞异常增生， 取代正常的骨髓组织。为最常见的骨髓增殖性疾病。95％以上慢性粒细胞 增加，从而导致了慢性粒细胞白血病的发病，目前酪氨酸酶抑制剂伊马替 尼(格列卫)的治疗是治疗慢性粒细胞白血病的首选药物，在其慢性期患 者取得令人鼓舞的疗效，使大多数处于慢性期的病人获得了细胞遗传学缓 解Ⅲ。但是应用伊马替尼治疗慢性粒细胞存在目前尚无法解决的两方面问 题。首先，因为伊马替尼为白血病基因产物的抑制剂，不能根除致病基因， 患者需要终身服药，停药导致疾病复发。其次是在应用伊马替尼治疗的病 人的耐药问题，残留的致病基因及BCRJABL融合基因出现点突变是引起 伊马替尼对慢性粒细胞白血病耐药的原因之一，【羽当然除此之外BCPUABL 基因的扩增，BCPUABL染色体以外合并其他染色体突变等等都是造成伊 马替尼疗效不佳或是耐药的原因。应运而生的新的酪氨酸激酶抑制剂现在 已开始应用，现被应用于临床的有达沙替尼及尼罗替尼等，部分病人取得 了很好的临床疗效。但新的酪氨酸激酶抑制剂仍存在着仅仅对致病基因有 抑制作用，而无法根除致病基因的问题。且目前任何所有酪氨酸激酶抑制 剂对T3151BCR／ABL融合基因突变无效果，‘31故现在正在实验室或是早 期临床试验正在对慢性粒细胞白血病治疗进行多方面研究，硼替佐米是第 一个被应用于临床的蛋白酶体，现被美国FDA批准在复发难治的多发性 骨髓瘤及套细胞淋巴瘤上，且很多研究表明硼替佐米不仅仅对多发性骨髓 瘤及淋巴瘤有疗效，在众多体外实验中表明对很多恶性肿瘤，包括实体瘤 及血液系统恶性疾病均有一定的抑制作用。目前关于其起作用的机制还未 完全清楚，PTPROt基因是潜在的肿瘤候选基因，本课题前期研究已经证 实慢性粒细胞白血病患者的PTPROtmRNA表达水平下降，加速急变期较 mRNA 慢性期表达水平低，且经5．杂氮胞苷作用后的CML病人PTPROt 中文摘要 重新表达。CML的发病与PTPROt基因低表达有关，为了解硼替佐米的 作用机制是否与上调PTPROt基因的表达有关，本实验选用硼替佐米和 阿糖胞昔单药联合共同用药，同时改变两药应用序次，观察其对K562细 胞株的抑制作用和凋亡，并观察用药前后PTPROt基因表达情况。为硼替 佐米单药或是联合用药应用于治疗慢性粒细胞白血病提供理论基础。 为6组。分别为1．阿糖胞苷处理6小时后序贯给予硼替佐米非干预组2． 硼替佐米处理6小时后序贯给予阿糖胞苷组3．同时给予硼替佐米和阿糖 胞苷4邝可糖胞苷处理组5．硼替佐米处理组6．对照组。用药48小时，应用 MTT法检查各组细胞增殖抑制率，应用流式细胞术检测凋亡率，应用聚 合酶链式反应(PCR)检测PTPRO基因表达量的变化。 · 结果： 1MTT结果显示：单药和联合用药均可抑制K562细胞的增殖率。联 合用药好于单独作用，其中先用阿糖胞苷处理后再给予硼替佐米组抑制作 用最强，其次为同时处理组，再其次为先给予硼替佐米后再给予硼替佐米 组。 2流式细胞仪结果：单药和联合用药可以使凋亡率增加，联合用药作 用强于单药应用。其中先阿糖胞苷处理后再给予硼替佐米组作用最强。其 次为先用阿糖胞苷后再给予硼替佐米组，再其次为先给予硼替佐米后给予 阿糖胞苷组。 3PCR结果显示：单药硼替佐米和联合阿糖胞苷均可以使PTPROt基 因表达量上调，阿糖胞苷单药应用不能使PTPR0t基因表达量上调。 结论：硼替佐米和阿糖胞苷均可以抑制K562细胞增殖，诱导细胞凋 亡，联合用药优于单药应用，其中以先阿糖胞苷处理后应用硼替佐米组作 用最强。 关键词：硼替佐米；PTPROt基因；阿糖胞苷；K562细胞；慢性粒 细胞白血病 英文摘要