基于细胞的噬菌体抗体库选技术.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１２）：８２～８８ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 综　　述 殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 基于细胞的噬菌体抗体库筛选技术 １ ２ １ 尹长城 　黄华睴 　阎锡蕴 （１中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室　北京　１００１０１　２北京安波特基因工程技术有限公司　北京　１０２２０６） 摘要　肿瘤细胞表面抗原的表达量低，免疫原性弱，用固定化抗原方法筛选时，因抗原构象改变 而很难获得有价值的抗体。同时，这类抗原多具有复杂的结构，其转运、定位与细胞类型及所处 的微环境有关。在基于细胞的筛选中，靶抗原处于天然状态，且不需纯化，甚至可以对未知抗原 进行筛选，因此广泛用于对内化抗体和血管内皮抗原表位抗体的筛选。基于细胞筛选的主要问 题是非特异结合导致的选择背景过高，为此，许多研究都致力于改善选择的灵敏度和特异性。伴 随高通量流式细胞术、组合化学及蛋白质组学研究技术的运用，细胞筛选技术将更趋实用和成 熟。拟对细胞和组织的筛选技术作一概括，为了解基于细胞的筛选和优化实验设计提供参考。 关键词　抗体　细胞筛选　噬菌体展示 中图分类号　Ｑ８１９ ［８～１２］ ［１３］ 　　自单克隆抗体技术问世以来，除目前获批用于临 研究 日益广泛。针对结肠癌 、乳腺癌 、肺腺 床治疗的２０余种抗体外，更多的抗体广泛用于诊断和 ［１４，１５］ ［１６］ ［１６～１８］ ［１９］ 癌 、胰腺癌 、前列腺癌 、卵巢癌 、黑色素 科学研究之中。特别是过去２０年间，随着ＰＣＲ和噬菌 ［２０，２１］ ［２２～２４］ ［２５］ 瘤 、急性髓白血病 以及神经胶质瘤 等多种 体展示技术的出现，抗体分子展示技术也不断发展，继 肿瘤都有细胞筛选的报道。此外，该技术也用于细胞 噬菌体展示技术之后，核糖体展示［１］、ｍＲＮＡ展示［２，３］ 表面受体［２６，２７］和血管内皮细胞抗原表位［２８，２９］抗体的筛 ［４］ ［５］ 选，还可用于抗原鉴定［１３，１６，２４，３０，３１］。针对细胞的抗体筛 等体外展示技术以及细菌展示 、酵母展示 等多种 细胞展示技术的应用也日趋广泛，。这些展示系统筛 选包括靶细胞的确定、构建抗体库以及抗体的筛选和 选的靶点依然以固定化抗原为主。 鉴定几个环节。 １．１　细胞表面抗原的特殊性 １　基于细胞的抗体筛选 　　肿瘤抗原多为蛋白质或糖蛋白，种类繁多，而且表 　　在对肿瘤抗原和受体等膜蛋白的筛选中，保持其 达量很低，因此难以分离和纯化。与新生血管生成有 天然构象至关重要，因此常规的固相筛选难以胜任，而 关的血管上皮抗原表位也与肿瘤的发生和转移密切相 对表达这些抗原的完整细胞进行筛选可以避免构象改 关，这些肿瘤相关抗原和受体蛋白一样，多具有膜蛋白 变引起的问题，除完整细胞外，细胞膜制备物以及肿瘤 的结构特征，或是可以形成复杂的结构。常规的固相 组织切片上的抗原蛋白都可以维持天然构象，因此，这 筛选中，包被的固定化抗原不能保持天然构象，因而不 些材料也可以作为筛选细胞表面抗原的靶材料。基于