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利用反应面法对使用廉价生物氮源进行的红霉素分批补料发酵的优化翻译
文献翻译利用反应曲面法对使用廉价生物氮源进行的红霉素分批补料发酵的优化X. Zou, C.-F. Chen,H.-F. Hang, J. Chu, Y.-P. Zhuang, and S.-L. Zhang摘要为了红霉素的生产,发展了一种新颖的由多菌种发酵产生的生物氮源来源。这种由玉米浆、生物氮和黄豆粉构成的氮组成首先是使用RSM(Response surface methodology,反应曲面法)进行最优化的。使用Box-Behnken法估计出用于红霉素生产的最适宜的氮组成如下:玉米浆γ=5.1g·L-1,生物氮γ=5.96g·L-1和黄豆粉γ=24.17g·L-1。基于这种最适宜的氮源物质,葡萄糖连续补料和pH控制补料策略分别用于对50L搅拌生物反应器中的红霉素生产进行进一步优化。实验中发现pH控制在红霉素生产中能充当有效的调控策略,而且红霉素的最高产量为190小时内生产8528U·mL-1。这项工作证明了基于这种廉价的氮源物质——生物氮的新培养基,是一种经济的大规模红霉素生产的可行的选择。关键词生物氮,红霉素生产,分批补料策略,培养基优化,反应曲面分类研究法,红色糖多孢菌引言红霉素是一种用于治疗多种有细菌引起的传染病的大环内酯类抗菌素,由红色糖多孢菌发酵产生。[1-3]红霉素也被推荐给一些对青霉素过敏或治疗中青霉素无效的病人。近年来,红霉素与其半合成衍生物被广泛用于医学。因而为市场提供质优价廉的红霉素产品是一项大的需求。红霉素发酵时一种经典抗生素发酵过程。尽管曾在使用经典诱变和代谢工程策略进行红霉素菌种改良上做过一些努力,[4,5]发酵培养基的最优化仍然在红霉素生产和原材料成本中扮演着重要角色。在我们以前的研究中,黄豆粉被用作红霉素发酵的主要氮源,[6]然而在中国,黄豆粉的价格最近涨了30%~40%。红霉素发酵需要一种经济的氮源以缩减原材料的成本。生物氮(商品名:鑫氮素,由北京Jinruikang生物技术有限公司生产),作为一种新颖的生物氮源,由使用农副产品(大豆粕,棉籽粕,和油菜籽粕)为主要原材料通过多菌种发酵产生。与黄豆饼粉,棉籽饼粉,和鱼粉等常规氮产品相比,生物氮具有更稳定的质量,便宜和高含氮量,而且在中国生物氮比黄豆粉便宜50%。统计实验设计这种能有效地找出目标响应的最优化条件的方法已经被使用了几十年。反应曲面分类研究法(RSM)是一种在审查和优化培养基和流程中有用的统计技术,且已经被成功地用于一些抗生素发酵过程的最优化当中。[7-9]反应曲面分类研究法(RSM)适用于使用Box-Behnken法优化氮源组成。基于最优的氮源组成,一种不同的包括连续葡萄糖补料和pH控制补料的补料策略更多的用于优化50L搅拌生物反应器中的红霉素生产。这项工作的目标是研究在廉价氮源的影响下的红霉素发酵,而反馈的信息对于使用红色糖多孢菌进行低成本的红霉素有效生产的大规模发酵是有帮组的。材料和方法微生物和培养方法由Yidu HEC Biochem. Co. Ltd.(中国湖北)提供的8号红色糖多孢菌用于在液体培养的条件下生产红霉素。将孢子接种到琼脂斜面中并在32℃的环境中培养7天,然后用于种子培养接种。对于种子培养来说,其培养基组成为(γ/g·L-1):淀粉 30,黄豆粉 15,氯化钠 5,硫酸铵 2,pH 7.0。种子培养是在装有5mL液体培养基的500mL摇瓶中进行,并置于32℃的摇床(220rpm)中培养两天。在发酵中,培养基作为控制物,每种营养物的浓度如下(γ/g·L-1):可溶性淀粉 40,糊精 30,豆粕 32,玉米浆 15,碳酸钙 5,氯化钠 2,pH 7.0。发酵培养接种在ψ=10%(1·108个mL-1)的上述种子培养基中,并在32℃和220rpm的摇床中仲培养7天。原料玉米浆由中国湖北YichangHuacheng发酵公司处获得,而黄豆粉由中国湖北YichangMingyuan技术公司处获得。生物氮从中国北京Jinruikang生物技术有限公司处购得。玉米浆,黄豆粉和生物氮中蛋白质的质量分数由凯氏定氮法测定分别达到w=22.5%,42%和53.7%。[10]Box-Behnken设计目前研究中使用的RSM法是一种包含3种不同氮因子(玉米浆,生物氮,和黄豆粉)的Box-Behnken设计,作为控制因素,其他的培养基成分是相同的。如表1所示,玉米浆(X1),生物氮(X2),和黄豆粉(X3)规定为3种代码级(-1,0,+1)。根据应用设计,使用了15种组合,而且其试验结果在多元回归技术上都符合公式(1)这个二级多项式。表1 在Box-Behnken设计中的过程变量和水平变量符号变量代码-10+1玉米浆(γ/g·L-1)X151015生物氮(γ/g·L-1)X2468黄豆粉(γ/g·L-1)X3202530 (
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