结节性甲状腺疾病DAPK,RARβ2基因甲基化及mRNA表达及临床意义.pdfVIP

摘 要 目 的 探讨结节性 甲状腺疾病患者外周血中死亡相关蛋白激酶(deathassociated protein kinase，DAPK)基因，维甲酸受体 β2(retinoic acid receptor,RARβ2)基 因启动子区的 CpG 岛甲基化状态及mRNA 表达并探讨其临床意义，为甲状腺结节、肿 瘤寻找新的肿瘤标记物和抗结节治疗及靶向治疗提供依据。方 法 选择2007年9 月～ 2011 年 12 确诊的结节性甲状腺疾病患者 （结节性甲状腺肿41 例，甲状腺腺瘤 32 例， ， grave s 病合并结节 34 例，桥本合并结节 40 例，甲状腺癌 23 例）共 170 例和正常 对照组 30 例，采空腹静脉血，应用甲基化特异性 PCR 方法（Methylation- specific PCR ，MSP）检测DAPK，RAR β2 基因甲基化状态；应用逆转录聚合酶链反应 (Reversed transcriptive polymerase chain reaction RT-PCR)方法检测外周血 DAPK，RAR β2 2 基因的 mRNA 表达情况。采用 SPSS 13.0 统计软件，用χ 检验评估组间甲基化状态及 其 mRNA 表达，以P0.05 为差异，有统计学意义。分析外周血 DAPK，RAR β2 基因甲 基化与其基因表达之间关系。结 果 （1）在甲状腺癌中 DAPK，RAR β2 基因呈高甲基 化率 （分别为39.1%，43.5%），与正常对照组比较 (P=0.000,0.000，P＜0.05) 具显 著性差异；（2）在甲状腺腺瘤组中 DAPK 呈高甲基化率 （21.8%），与正常对照组比较 （P＝0.033,P＜0.05），有统计学意义；在桥本甲状腺炎组 RAR β2 基因呈高甲基化率 （35%），与正常对照组比较（P=0.001,P＜0.05），具显著性差异；（3）在有钙化点或 淋巴结肿大的甲状腺癌中，DAPK，RAR β2 基因呈高甲基化率 （fisher 值＝0.040， 0.018；0.029，0.019，P＜0.05）,具统计学意义，在甲状腺癌组 DAPK，RAR β2 基因 的甲基化与患者的年龄，性别，结节大小比较 fisher 值＞0.05，无统计学意义。（4） DAPK 基因在甲状腺癌，甲状腺腺瘤中 mRNA 表达减低或表达缺失,与正常对照组比较 (P＝0.000，0.003，P＜0.05）,有显著性差异；RAR β2 基因在甲状腺癌，桥本甲状 腺炎合并结节中 mRNA 表达减低或表达缺失，与正常对照组比较 (P＝0.000，0.002，P ＜0.05）有显著性差异。（5）DAPK，RAR β2 基因的表达减低或缺失与基因启动子区 异常甲基化有关；基因甲基化与 mRNA 表达呈负相关。结 论 （1）DAPK，RAR β2 基因 在甲状腺癌外周血中呈高甲基化率，而其mRNA 表达减低或表达缺失；DAPK 基因在甲 状腺腺瘤中呈高甲基化率,甲基化率低于甲状腺癌组，mRNA 表达减低；RAR β2 基因在 桥本甲状腺炎外周血中呈高甲基化率，mRNA 表达减低。（2）甲状腺癌中 DAPK，RAR β2 基因甲基化与性别，年龄，结节大小无显著差异，与结节钙化及颈部淋巴结肿大 有关。 (3)联合检测 DAPK 、RAR β2 基因甲基化状态能明显提高甲状腺癌的诊断敏感 度，有可能成为甲状腺癌早期诊断的有效指标。(4)DAPK，RAR β2 基因的表达缺失与 基因启动子区异常甲基化有关。 关键词：DAPK；RAR β2；结节性甲状腺疾病；甲基化；mRNA 表达；外周血 The Methylation and mRNA Expression and Clinical Significance Of DAPK, RARβ2 Gene in Thyroid Nodular Disease Abstract Objective To study the gene of deathassociated protein kinase, DAPK in Nodular thyroid disease in patients peripheral blood, the CpG island state