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绿原酸体外抑制肠道病毒71 型的效应机制 中文摘要 绿原酸体外抑制肠道病毒71 型的效应机制 中文摘要 目的：探讨绿原酸对肠道病毒71 型（EV71 ）的抑制作用及分子机制。 方法：（1）斑块形成试验检测不同浓度绿原酸对EV71 感染的抑制作用；（2 ）噻 唑蓝（MTT ）法检测不同浓度绿原酸和利巴韦林对RD 细胞的细胞毒作用；病毒斑块 减少试验分析绿原酸对EV71 吸附作用的影响；（3 ）时间过程试验检测绿原酸抑制效 用与病毒生命周期的相关性；（4 ）绿原酸处理 RD 细胞后，采用 RT-PCR 和 Western-Blotting 法检测不同时间点EV71 /VP1 、2A、3C 和3D mRNA 及蛋白酶的表 达。 结果：（1）绿原酸在5、10 和20 µg/mL 剂量时对EV71 具有良好的抑制率，分 别为83.4±3.0%、88.7±1.9%和94.7±1.8 %，其半数抑制浓度（IC50 ）=45.7 µg/mL 。利 巴韦林在20 、40 和80µg/mL 剂量时对EV71 具有良好的抑制率，分别为84.5±1.1%、 95.6±2.2%和85.4±4.6%，其IC50=195.2 µg/mL ；（2 ）绿原酸低于50 µg/mL 剂量处理 时，细胞活率与空白对照组相比较并没有显著下降，其半数细胞毒性浓度（CC50 ） =143.5 µg/mL 。而利巴韦林低于150 µg/mL 时对RD 细胞的存活率亦无明显影响，其 CC50=1187.2 µg/mL ；（3 ）20 μg/mL 绿原酸与病毒同时加入或病毒吸附1 h 后加入， 两种方法不同时间点细胞裂解液上清病毒滴度的降低差异无统计意义（P 0.05 ）；（4 ） 绿原酸在EV71 感染RD 细胞后0-8 h 加入，能显著抑制EV71 复制；而在EV71 感染 后10-24 h 加入绿原酸，仅有部分或轻微抑制EV71 复制效应；（5 ）EV71 感染RD 细 胞后4h 和8h 绿原酸可阻碍EV71/2A mRNA 表达，但未影响EV71/VP1 、3C 和3D mRNA 表达；（6 ）绿原酸处理EV71 感染RD 细胞后4h 和8h ，未能检测出EV71/2A 蛋白酶 ，但EV71/VP1 、3C 和3D 蛋白表达未受影响。 结论：（1）绿原酸具有良好的抑制EV71 病毒复制效用；（2 ）绿原酸对EV71 感 染的抑制效应与阻止病毒吸附无关；（3 ）绿原酸主要通过干扰 EV71 复制早期 2A mRNA 表达和蛋白翻译而发挥抗病毒效应。 I 中文摘要 绿原酸体外抑制肠道病毒71 型的效应机制 关键词：绿原酸； EV71 ；2A 蛋白酶；3C 蛋白酶 作 者：李 祥 指导老师：史伟峰 II Study on the effect and mechanism of chlorogenic acid against enterovirus 71 in vitro Abstact Study on the effect and mechanism of chlorogenic acid against enterovirus 71 in vitro Abstact Objective: To explore the inhibitory effect and molecular mechanism of chlorogenic