绿原酸对氧化应激损伤内皮细胞的保护作用和机制探讨.pdfVIP

854 ＼掣燃攀燃Y1957 摘要 摘 要 目的： 缺血性脑卒中是临床常见疾病之一，死亡率和致残率均较高，遗留的神经 功能障碍一直是困扰着神经科学的重大难题。脑组织发生缺血后可导致缺血区 神经元的坏死，及时恢复缺血区血运是治疗脑缺血的关键。目前研究表明脑缺 血后缺血区会有代偿性的血管新生，血管新生可以恢复缺血区的血供，同时还 可以分泌神经营养因子，为缺血区营造一微环境，促进受损神经元功能的恢复。 血管新生和微环境的营造主要靠缺血区周围的内皮细胞来实现，但脑缺血后会 在其周围发生氧化应激反应，损伤内皮细胞，抑制了血管新生和神经营养因子 的释放。近年来，有研究表明绿原酸具抗氧化作用，可有效的清除自由基，保 护组织细胞免受氧化损伤。但绿原酸是否对内皮细胞具有抗氧化应激损伤作用 及其可能机制尚待研究证实。本课题拟通过观察绿原酸对氧化应激损伤内皮细 胞的保护作用及线粒体凋亡途径分子在该过程中的表达变化，探讨绿原酸对内 皮细胞的抗凋亡作用及其可能机制，为将来临床上更好的利用绿原酸治疗缺血 性脑卒中提供理论依据。 方法： 胞仪测定细胞凋亡率，建立氧化应激损伤模型。 2．实验分四组：正常对照组，绿原酸组，H202损伤组，绿原酸保护组：各 实验组细胞分别给予相应处理12h后待检。 3．流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率。 4．线粒体膜电位检测各实验组细胞凋亡情况。 5．Hoechst33258荧光染色观察各实验组细胞凋亡情况。 6．RT．PCR检测各实验组细胞的Bcl．2、CaspaSe．3的mRNA表达水平。 7．Western blot检测各实验组细胞的Bcl．2、C唧ase．3的蛋白表达水平。 结果： 1．H202以浓度和时间依赖性诱导HUVECs凋亡，建立氧化应激损伤模型适宜 条件为4009tMH202处理HUVECsl2h。 2．流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率(％)：正常对照组：5．184-2．13， n 摘要 结果可见H202损伤组细胞凋亡率明显高于正常对照组(PO．05)，绿原酸保护组 原酸具有明显的抗凋亡功能。 3．细胞线粒体膜电位检测可见H202可诱导HUVECs凋亡，绿原酸具有明显 的抗凋亡功能。 抗凋亡功能。 6．Western blot显示绿原酸保护组Bcl．2蛋白表达水平明显高于H202损伤组 酸保护HUVECs时上调了Bcl．2蛋白的表达，下调TCaspase．3蛋白的表达。 结论： 1．H202以浓度和时间依赖性诱导HUVECs凋亡。 2．绿原酸具有明显的抗氧化应激损伤保护HUVECs的作用。 3．绿原酸保护HUVECs的机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。 关键词： 人脐静脉内皮细胞、绿原酸、氧化应激、凋亡、保护、血管新生 分化为内皮细胞及促进血管新生的调控机制》资助。 III Abstract ABSTRACT and 0bjective： Background IschemicstrokeiSacommondiseasein clinical．whichand mortalitymorbidity are the nerve isstilla hi曲．But remainingdysfunctionmajorproblemplagued