肌萎缩侧索硬中线粒体的动力学变化.pdfVIP

中文摘要 肌萎缩侧索硬化中线粒体的动力学变化 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic 择性上下运动神经元丢失为特征的致死性神经变性病。临床上表现为肌无 力、肌萎缩，其感觉和括约肌的功能一般不受影响。迄今为止其发病机制 仍不明确，研究发现ALS与氧化应激、线粒体的损伤、谷氨酸兴奋性毒 性、炎症、凋亡等有关。随着研究的深入，人们发现线粒体功能障碍在 ALS发生发展过程中起重要作用，成为ALS各种病生理改变的交汇点。 线粒体是高度动态的细胞器，参与能量的生产和转运。线粒体的动态 变化包括融合和分裂两个过程，在哺乳动物细胞中，融合过程主要由 控，线粒体分裂参与线粒体的更新、重新分布等。线粒体融合分裂对维持 线粒体的正常形态和功能十分重要，它促进线粒体DNA及其内容物混合， 决定线粒体的形状、数量、功能。这两个过程的紊乱将会导致线粒体的延 长和片段化，降低线粒体生物活性，减少细胞能量供应，最终导致细胞受 的基因突变导致视神经萎缩，常染色体显性遗传视神经萎缩症(ADOA)， Drpl的突变可以导致人类婴儿致死性的缺陷。线粒体动态变化及其导致 的功能障碍在帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病等相关神经退行性疾病 中也有深入研究。据报道，在ALS病人及ALS的各种动物模型中都已发 现线粒体形态及功能的异常，其包括：线粒体嵴断裂及消失、空泡化、呼 吸链活性下降等改变。但是对其原因尚不清楚，鉴于线粒体的分裂融合和 线粒体功能的密切相关性，为了寻求线粒体形态和功能异常的可能性原 小鼠腰髓线粒体动力学的变化，并探讨其在ALS的发生和发展中所起的 作用。 中文摘要 之一。选取SODl．G93A转基因雌性小鼠为实验组，根据病程分为症状前 期组、症状早期组、终末期组，选取90天的雌性同窝阴性小鼠作为对照组， 腰髓迅速投入液氮冷冻，之后保存于．80。C冰箱，4％多聚甲醛经心脏灌注， 之后剥离小鼠腰髓，用4％多聚甲醛浸泡或用2．5％戊二醛固定组织。我们 运用电镜观察线粒体形态改变。利用Westem 在运动神经元和胶质细胞表达情况。免疫组化技术观察线粒体融合蛋白 Mfnl、OPAl在运动神经元细胞和胶质细胞中的表达情况。 结果： 1、ALS小鼠腰髓前角细胞中线粒体的形态及结构变化：线粒体早在 症状前期即出现肿胀，空泡化，嵴断裂、消失等变化，随着疾病的进展线 粒体肿胀，空泡化进一步加剧，到终末期可见明显的气球样肿胀的线粒体。 性对照组相比，症状早期组和终末期组线粒体融合蛋白Mfnl、OPAl表 达量均减少，具有统计学意义；与阴性对照组相比，症状前期组Mfnl表 达量有下降趋势，症状前期组OPAl表达量有增高趋势，但均无统计学意 义。与阴性对照组相比，症状早期组和终末期组线粒体分裂蛋白p-Drpl、 Fisl表达量均增多，具有统计学意义；与阴性对照组相比，症状前期组 P．Drpl、Fisl表达量有增高趋势，但均无统计学意义。 症状早期组和终末期组中线粒体融合蛋白Mfnl表达量均减少，差别均具 有统计学意义；与阴性对照组相比，症状前期组Mfnl表达量有增高趋势， 差别无统计学意义。与阴性对照组相比，症状早期组和终末期组线粒体分 裂蛋白p-Drpl表达量均增多，差别均具有统计学意义；与阴性对照组相 比，症状前期组P．Drpl表达量有增高趋势，差别无统计学意义。 经元中的表达情况：通过激光共聚焦技术发现，与阴性对照组相比，症状 中文摘要 标记物SMI．32共定位无明显改变。与阴性对照组相比，症状早期组和终 SMI．32共定位无明显改变。通过免疫组化技术发现，与阴性对照组相比， 疫活性无明显改变。 相对于阴性对照组，症状早期组和终末期组线粒体融合蛋白OPAl和胶质 GFAP共定位无明显改变。与阴性对照组相比，各个时期线粒体Mfnl、 组化技术发现，与阴性对照组相比，症状早期组和终末期组线粒体融合蛋 的免疫活性无明显改变；与阴性对照组相比，各个时期线粒体Mfnl、 P—Drp、Fisl蛋白在胶质细胞中的免疫活性无明显改变。 上升，说明ALS小鼠腰髓运动神经元中线粒体分裂融合机制失衡，分裂 增多，融合减少，提示ALS小