脑缺血预处理通过PI3KAktGSK3β信号通路减轻缺血性脑损伤和抑制凋亡的机制研究.pdfVIP

脑损伤及抑制凋亡的机制研究 博士研究生： 张慧 指导教师： 尹琳教授 指导小组： 姜长斌教授 专业名称： 内科学 摘要 目前中风在全世界是第二大成人死因，造成长期残疾的主要病因。脑中风可 分为两大类：出血性和缺血性中风。其中缺血性大约占70．80％。缺血性脑损伤涉 及到复杂的病理生理机制，包括兴奋性氨基酸中毒、离子稳态破坏、氧自由基损 伤、炎症反应以及细胞凋亡等机制。目前在对心脏的研究中已发现缺血预处理 (Ischemie l【inaSe) 缺血预处理的脑保护机制仍不清楚。磷脂酰肌醇．3激酶(Phosphoinosifide．3 P13K／Akt细胞内信号途径具有促进细胞增殖分化，调节细胞存活等广泛的生物学 效应。研究提示P13K／Akt信号通路在缺血预处理中起非常重要的调控作用。Bcl一2 家族中的MCLol作为一个重要的抗凋亡成员，在细胞的生存与凋亡的调控中发挥 重要作用，然而MCL．1是否参与缺血预处理抑制细胞凋亡并在其中发挥重要作用 目前国内外未见相关报道。本研究旨在通过建立大鼠脑缺血预处理(Cerebral ischemic 信号通路和Gsrdp抑制剂氯化锂抑制GSrdp活性，研究脑缺血预处理后海马组 化，探讨P13K／Akt／GSK313信号通路在脑缺血预处理中的调控作用。 第一部分脑缺血预处理动物模型的建立及对海马神经元细胞的凋亡影响 目的：建立SD大鼠局灶．局灶的脑缺血耐受模型，考察CIPC通过 P13K／Akt／GSK313信号途径对海马神经元凋亡的影响，从行为学、组织学及神经元 凋亡等方面研究脑缺血预处理(CIPC)所诱导的内源性神经保护作用。 rain MCAO后处死。健康 栓法先后给予SD大鼠3x10CIPC，间隔l天后给予24h 雄性SD大鼠随机分为五组：假手术组(Sham)，脑缺血组(IS)，脑缺血+脑缺血预处 损、梗死体积和组织凋亡变化。 结果：与缺血组大鼠相比，CIPC组大鼠神经功能缺失明显减轻(P0．05)， 特异性抑制剂氯化锂可以使大鼠神经功能缺失进一步减轻(P0．05)，脑梗死体 积明显减少(PO．05)，海马凋亡细胞明显减少(PO．05)。 结论：缺血预处理组对再次缺血可产生脑保护作用，增强脑组织对脑缺血的 缺血预处理前联合应用氯化锂干预，可进一步减轻神经细胞凋亡，对神经保护有 关键词：脑缺血预处理模型凋亡P13K／Akt／GSK3p 第二部分P13K／Akt／GSK3p信号通路在脑缺血预处理中的脑保护作用机制 关。 方法：健康雄性SD大鼠随机分为五组：假手术组(Sham)，脑缺血组(IS)，脑 (LiCL)。应用Western MCL．1的蛋白表达，RT．PCR检测GSK3p、PP2A的转录。 LY294002所废止。与缺血组及预处理组相比较，氯化锂能增加P—Akt、MCL．1、 mRNA水平的转录(PO．05)。 了GSK．3D 减轻脑缺血损伤，发挥脑保护作用。 PP2AMCL．1 关键词：脑缺血预处理P13K／Akt／GSK3Ii PDKl 2 径 目的：探讨大鼠持续性脑缺血后在缺血海马脑组织中线粒体通透性转换孔开 通过P13K／Akt／GSK313通路抑制线粒体凋亡途径，从而减轻缺血性脑损伤。 模型。在缺血后24小时，用Western 平；分光光度法测定各组大鼠海马缺血神经元MPTP的开放度。 抑制剂氯化锂减少MPTP开放、降低caLspase．3，9的表达。 结论：持续性脑缺血诱导海马缺血脑组织神经元线粒体MPTP的开放和 成神经元的死亡，这可能是缺血预处理减轻缺血性脑损伤的机制之一。 MPTP 关键词：脑缺血预处理P13K／Akt／GSK313caspase．9caspaSe．3