体内外研究慢病毒介导的Pygo2shRNA抑制肾癌OS-RC-2细胞增殖和侵袭性.pdfVIP

目录 中文摘要 1 Abstract 2 1.前言 3 2.材料与方法7 2.1 主要仪器7 2.2 生物材料7 2.3 主要试剂来源 8 2.4 主要试剂配制 8 2.5 实验方法 10 2.6 统计学方法20 3.实验结果2 1 3.1.293FT 细胞包装病毒情况2 1 3.2 肾癌OS-RC-2 细胞感染情况 22 3.3 WB 实验验证蛋白表达情况 23 3.4 细胞生长曲线（MTT ）23 3.5 克隆形成（colony formation ） .24 3.6 细胞侵袭实验（cell transwell ）25 3.7 裸鼠成瘤实验26 3.8 HE 染色结果 28 3.9 Pygo2 的表达与 MMP-7、MMP-9、VEGF 的关系 29 4.讨论32 5.结论34 参考文献35 中文摘要 体内外研究慢病毒介导的 Pygo2shRNA 抑制肾癌 OS-RC-2 细胞 增殖及侵袭性 研究生：秦祥成 导师：刘荣福教授 目的 体内实验研究 Pygo2 在肾癌 OS-RC-2 细胞增值、侵袭性发生的作用，体 外实验进一步验证 Pygo2 在肿瘤生长的作用以及与肿瘤侵袭、转移的关系。 方法 通过慢病毒介导三质粒重组，建立 Pygo2 沉默组,Pygo2 过表达组以及相应 的对照组。利用慢病毒感染肾癌 OS-RC-2 细胞，并用 Western Blot 检测感染 Pygo2 改变的效率。通过 MTT 和克隆形成实验，检测各组细胞的增值能力。 Transwell 实验研究 Pygo2 在侵袭方面的作用。通过筛选细胞建立稳定细胞系， 并将 4 种肾癌 OS-RC-2 细胞植于裸鼠腋下，连续观察裸鼠皮下肿瘤及肺部转移 瘤的生长情况。HE 染色观察肺部转移瘤情况。免疫组化实验测定各组肿瘤组织 的侵袭性蛋白（MMP-9、MMP-7 和 VEGF ）。 结果 Pygo2 的下调，肾癌 OS-RC-2 细胞增值能力和侵袭性明显降低。成功筛选 出Pygo2shRNA （Pygo2 的抑制组）、Pygo2scrRNA(空载体）、GFP （对照组）和 Pygo2OE （Pygo2 的过表达）的稳定感染细胞株，并成功构建裸鼠荷瘤模型， Pygo2shRNA 组的肿瘤生长明显受到抑制，Pygo2OE 组肺部有转移瘤。免疫组化 实验研究表明 Pygo2shRNA 能够显著减少 MMP-7 和 VEGF 的表达，与减少 MMP-7 和 VEGF 的表达量相比较，Pygo2shRNA 不能明显减少 MMP-9 的表达 量。 结论 Pygo2 能够在体内外促进肾癌OS-RC-2 细胞增殖及侵袭性。 关键词 Pygo2, MMP-7, MMP-9, VEGF 1 Abstract Lentivirus-Mediated Pygo2shRNA Inhibits Proliferation and Invasion of Kidney Carcinoma OS-RC-2 Cells In Vivo and Vitro Postgraduate : Xiangcheng, Qin Supervisor : Pro Rongfu, Liu Object