14种病害的科赫法则试验.docVIP

下面文字，仅供参考 14种病害的科赫法则实验 从田间采回的患病植株上，可能会培养出多种微生物。分离出的微生物，可能是病原菌，也可能是二次侵入菌（secondary invaders），更可能是腐生菌（saprophytes）。欲证明病原菌的致病性（pathogencity），科赫法则（Kochs postulates）是不二法门。 科赫法则： （1） 在病株患病部位常可发现可能的病原菌。 （2） 病原菌常可在培养基被分离培养(记录各项特征)。 （3） 纯培养的病原菌应接种至与病株相同品种的健康植株，并产生与病株相同的病征。 （4） 从接种的病株上以相同的分离方法应能再分离（reisolate）出病原菌，且其特征与由原病株分离的应完全相同。 严格地说，科赫法则并不能适用于所有的植物病原。绝对寄生性病原，如锈病菌、露菌、白粉菌、病毒等，即无法进行纯粹培养。因比必须以其它的方法分离、纯化或培养在生物体中，才能进一步证明其中病原性。例如锈病菌、白粉菌等可取单孢接种于适当的健康寄主组织以进行分离、纯化并培养，以鉴定其特性。 虽然科赫法则费时、费力，却是不得不进行的验证。因为只有按照该法则才能证明病原菌的病原性，任何病害的病原菌若未经科赫法则或其它类似的方法证明其病原性，将不具任何说服力。 （1） 水稻纹枯病（Rhizoctonia solani） 分离：组织分离法或以菌核分离 分离用培养基：water agar 培养及保存用培养基：PDA 接种法：菌丝块接种法 （a） 由纯粹培养的菌落，切取适当大小之菌丝块，置入水稻叶鞘内。 （b） 水稻植株套以大型塑料袋，保持高湿度1-2天。 （c） 连续观察1-2周，并记录病征。 （d） 以未接种菌源之培养基块为对照。 （2） 水稻白叶枯病（Xanthomonas campestri pv. oryzae） 分离法：划线平板法或稀释平板法 分离用培养基：NA或PDA 接种法：剪叶接种法 （a） 挑起纯培养的菌落至无菌水，形成悬浮液（略成混浊状）。 （b） 以灭菌的剪刀沾细菌悬浮液。 （c） 剪下部分水稻叶片。 （d） 水稻植株套以大型塑料袋，保持高湿度1-2天。 （e） 连续观察1-2周，并记录病征。 （f） 以无菌剪刀沾无菌水剪叶以为对照。 （3） 水稻徒长病（Fuasrium moniliforme） 分离法：组织分离法、稀释平板法或划线平板法。 分离用培养基：WA或PCNB medium 培养及保存用培养基：corn meal agar或PDA 接种法：种子接种法 （a） 以1% chlorox消毒水稻种子，并以无菌水漂洗。 （b） 一部分种子阴干，一部分催芽（浸泡无菌水24hr） （c） 以无菌水制成孢子悬浮液（1×105 spore/ml） （d） 催芽种子浸泡在孢子悬浮液24hr后取出。 （e） 未催芽的种子浸孢子悬浮液后取出阴干。 （f） 上述种子分别种入土盆中，连续观察病征1-4周并记录病征。 （g） 以无菌水取代孢子悬浮液为对照。 （4） 蕃茄青枯病（Pseudomonsa solanacearum） 分离法：划线平板法或稀释平板法。 分离用培养基：NA或TCC medium 培养用培养基：NA或523 mrdium 保存用培养基：NA或无菌水。 接种法：剪根接种法 （a） 取蕃茄幼苗，洗净培养基质（蛭石或泥炭土） （b） 以灭菌剪刀剪去根部尖端。 （c） 幼苗浸入无菌水配制的细菌悬浮液1hr。 （d） 将幼苗植入土盆中，连续观察病征1-4周并记录。 （e） 以无菌水浸剪根幼苗为对照。 （5） 蕃茄幼苗疫病（Phytophthora capsici） 分离法：组织分离法或诱钓法 分离用培养基：WA或Ko’s medium 培养（产孢）用培养基：V-8 medium或无菌水 接种法：菌丝块接种法 （a） 取纯粹培养的菌丝块。 （b） 用胶带将菌丝块黏于蕃茄幼苗的茎部（菌丝面与组织接触）。 （c） 套上塑料袋以保持高湿度1-2天。 （d） 连续观察病征1-2周，并记录病征。 （6） 蕃茄萎凋病（Fuasrium oxysporum f. sp. lycopersici） 分离法：组织分离法（取维管束变色部位） 分离用培养基：WA或PCNB medium 培养（产孢）用培养基：PDB（potato dextrose broth）：PDA不含agar即是PDB。Fuasrium oxysporum f. sp. lycopersici 于PDB中震荡培养3-5天，即可产生大量小孢子。 保存用培养基：PDA 接种法：浸根法（root dip meth