IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡地影响.pdfVIP

曲医科人学硕Ij节化论文 第一章 前言 宫颈癌是危害广大妇女健康最常见的恶性肿瘤之一，据WHO报道世界每年新发现宫颈 癌病例约有50万，主要以发展中国家为多，其中我国每年新发病例有13．5万。近年来发 现，年轻妇女中宫颈癌的发病率呈明显上升的趋势…，发病以每年2％一3％的速度增长。宫 颈癌越来越引起人们广泛的关注。宫颈癌的传统治疗方法主要有手术、化疗和放疗，但手 术治疗仅限于早期的宫颈癌患者，而且可能剥夺年轻患者的生育功能，晚期患者只能依靠 放化疗。总之上述治疗手段均有一定的局限性，因此如何研究和发现防治宫颈癌的新技术 和新方法是摆在我们面前的一个重要而迫切的课题。 近年来，随着医学分子生物学理论和技术的发展、遗传学、基因工程技术的进步以及 对宫颈癌发病机制认识的不断深入，宫颈癌的基因治疗逐渐成为研究热点。基因治疗的基 本原理是利用基因转移技术将正常基因或有治疗作用的目的基因导入人体靶细胞，使其获 得特定的功能，以纠正基因的缺陷或者发挥其他作用，从而对肿瘤发病的分子环节进行干 预。基因治疗为宫颈癌的治疗开辟了新途径。与手术、化疗和放疗等传统治疗手段相比， 基因治疗可以控制癌细胞的增殖、预防和延缓癌症复发、转移，以及提高宫颈癌患者生活 质量。理想的治疗基因应能够有效地抑制肿瘤细胞生长，而对正常组织、细胞无明显抑制 作用。基于这种思路，我们选择了生物学活性广泛、并已证明在蛋白水平有抗肿瘤作用， 为靶基因‘引。 诱导的人黑色素瘤细胞cDNA文库中筛选到的。该基因在诱导分化的黑色素瘤细胞中高表 达，并能促进黑色素瘤细胞分化。由于MDA-7是一种小分子糖蛋白，与细胞因子具有结 起源的肿瘤细胞如多形性胶质母细胞瘤H’51，前列腺癌拍3，乳腺癌口1，鼻咽癌，黑素瘤乜’3一’ 0。，肝 引，卵巢癌…，肾癌，结肠癌，直肠癌口1，子宫内膜癌，纤维肉瘤，皮肤癌，胰腺癌n 癌…1，肺癌n2’1引，骨肉瘤细胞“41均有显著的生长抑制效应和诱导凋亡作用，但对正常细胞 无明显毒副作用…。而且，它还能在肿瘤组织内促进血管内皮细胞分化从而抑制血管形成。 IL24是一个分泌型细胞因子，可对周围癌细胞行旁观者杀灭效应¨5’161，具有刺激免疫系统 的功能，还能使某些癌细胞对射线更加敏感心别。目前的研究显示，IL-24／mda．7基因很可能 是第一个既抑制肿瘤生长又表达刺激免疫系统的蛋白基因，是目前发现的唯一一个细胞因 子类的抑癌基因。目前国内外对IL-24基因的原核表达的蛋白产物在宫颈癌的抗肿瘤方面 进行研究较多，但运用真核表达载体对IL-24基因在宫颈癌的抗肿瘤方面的研究不多见。 本研究拟以白介素24(IL-24)作为分子工具，采用真核表达载体为基因导入工具对 人宫颈癌中具有代表性的Siha细胞株进行实验研究(宫颈癌中鳞癌占70％左右，腺癌占20％ 叫医科人学硕l：学化沦义 左右，鳞腺癌占10％左右。为此，本研究中我们选择了鳞癌中比较具有代表性的Siha细胞 作为研究对象。)，主要探讨外源性IL广24的表达对宫颈癌Siha细胞生长和凋亡的影响及 其内在机制，以期为宫颈癌基因治疗的进一步深入研究奠定必要的实验基础。 第二章 材料和方法 2．1 材料 trackCMV和空载质 2．1．1细胞株和质粒来源：含有目的基因IL-24片断的穿梭质粒pAd track 粒pAd CMV均由四川大学华西第二医院熊炬博士惠赠，宫颈癌细胞株Siha细胞购自 中科院上海细胞库。大肠杆菌E．coli．DH5a为山西医科大学生物化学实验室保存。 2．1．2主要试剂和酶 0．25％胰蛋白酶 美国Sigma公司产品 DMSO(二甲基亚砜) 美国Sigma公司产品 2000 Lipofectamine Invitrogen公司产品 LB液体培养基 GIBCO公司产品 RPMll640培养基