针药结合对乳腺增生大鼠血清及乳腺vegfbfgf含量的影响.pptVIP

针药结合对乳腺增生大鼠血清及乳腺VEGF、bFGF的影响 河北医科大学 杜惠兰 靳亚慈 乳腺增生病在病理方面除了表现在上皮细胞、间质细胞、腺泡、导管等组织的增生外，亦存在着血管的增生。 目前血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生成因子（bFGF）被认为是乳腺癌特异性最强的两种血管因子。 推测乳腺增生中血管的生成可能与VEGF和bFGF密切相关。 因此，我们采用肌注外源性激素的方法复制乳腺增生大鼠模型，应用放免和免疫组织化学技术探讨乳腺增生病变与血清、乳腺VEGF和bFGF的关系以及针药协同作用对血清、乳腺VEGF和bFGF的调节治疗机制。 材料与方法 动物：清洁级雌性Wistar大鼠60只，75~85日龄，220±20g由 河北医科大学实验动物中心提供，合格证号：602089 药物和试验试剂 中药(柴胡、郁金、川楝子、王不留行、荔枝核、山慈菇等)采用传统煎煮方法，过滤，离心，浓缩制成水煎液，含生药2.75g/ml，密封分装，4℃放置备用 苯甲酸雌二醇、黄体酮均由天津金耀氨基酸有限公司生产 枸橼酸他莫昔芬（ TAM ）由上海医药集团有限公司华联制药厂生产 VEGF和bFGF酶联免疫试剂盒，购于美国R-D公司。E2、P放免试剂盒购于美国DSL公司。PRL放免试剂盒购于天津九鼎医学生物工程有限公司。 动物分组 大鼠适应性喂养2周后，按随机数字表法将其分为6组，每组10只： 正常组 模型组 模型+针刺组（简称“针刺组”） 模型+中药组（简称“中药组”） 模型+针刺+中药组（简称“针药组”） 模型+TAM阳性对照组（简称“对照组”） 复制模型 正常组大鼠常规喂养 其余组参照张璐[2]等造模方法，大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/日，连续25天，然后注射黄体酮5mg/kg/日，连续5天，建立大鼠乳腺增生模型。 治疗方法 从第31天开始，各组分别治疗: 针刺组：根据《中国兽医针灸学》结合人体穴位，选 取屋翳、合谷、膻中、足三里，每日1次，9 次为一疗程，疗程间休息1天，共30日。 中药组：按25g/kg/日灌服中药，30日。 针药组：针刺操作同针刺组，同时灌服中药，剂量同 中药组，30日。 对照组：三苯氧胺1.8mg/kg/日，相当于临床等效剂 量，30日。 正常组和模型组：灌服同体积蒸馏水，30日。 标本制备和检测方法 末次治疗5小时后，用游标卡尺测量第2对乳房的直径。 断头取血，制备血清，置-70℃保存，用放免法测定血清E2、P和PRL含量，酶免法测定血清VEGF和bFGF含量。 切取第2对乳房，甲醛固定，常规石蜡包埋切片，免疫组化染色。 美国IPP分析软件对免疫组化染色切片进行图像分析，每个切片采集5个视野，得出度量物质含量信息的灰度等级，将所得灰度值取平均数作为统计指标。 平均灰度与阳性表达强弱成反比，灰度值越小，阳性染色越强，蛋白表达越多。 统计方法 所有数据用均数±标准差表示 用SPSS12.0统计软件进行统计处理，对所测定结果进行正态性及方差齐性检验，组间比较用单因素方差分析 检验以P＜0.05为有统计学意义 结 果 动物一般状况 正常组：大鼠毛色白而光泽，精神佳，反应灵敏，饮食、二便正常，乳房大小正常，色淡红，质软，用棉签触压时大鼠无明显的痛苦感。 模型组：大鼠乳房乳头增大，色鲜红，质硬，用棉签触压时大鼠出现明显的痛苦感，易激惹。 大鼠乳头直径的变化 大鼠血清生殖激素的变化 血清VEGF的变化 血清bFGF的变化 乳腺组织VEGF、bFGF的表达 VEGF、bFGF的阳性表达定位于细胞浆内，为棕黄色染色。 与正常组相比，模型组大鼠乳腺组织中VEGF、bFGF的表达增强（P＜0.01）。 治疗后，针刺组、中药组和针药组VEGF、bFGF的表达均明显低于模型组（均P＜0.01）； 对照组与模型组比较有降低的趋势，但两组之间比较无统计学意义（P＞0.05）。 讨 论 乳腺增生大鼠模型的复制 多数学者认为，乳腺增生病的发生与内分泌紊乱、卵巢功能失调造成体内长时间的P不足、E2绝对或相对增多有关。 乳腺增生病被认为是乳腺癌癌前的一种良性病变，在病理方面除了表现在上皮细胞、间质细胞、腺泡、导管等组织的增生外，亦存在着血管的增生。血管增生在乳腺肿瘤的生长过程中起到了重要作用。 VEGF在健康成人组织中维持正常的血管密度和基本的渗透功能，以利于营养物质的运输，但表达水平极低，是机体内皮细胞特异性的分裂原和血管增生因子，对血管生成和血管通透性增加有重要的调节功能 VEG