国产北加ApoAⅠApoB参考品的WHO-IFCC靶值转移实验研究.docVIP

国产北加ApoAⅠ、ApoB参考品的WHO-IFCC靶值转移实验研究 陈铭生1， 王勤富2， 刘中令3 （1.上海第二医科大学附属仁济医院检验科，上海 200001； 2.上海利群医院，上海 200333； 3.上海北加生化试剂有限公司，上海 200060） 摘要：目的 载脂蛋白AⅠ、B（ApoAⅠ、ApoB）参考品与WHO-IFCC国际标准品靶值转移，制备定值可溯源国际标准的国产北加参考品。方法 检测方法采用免疫透射比浊法（终点法）；靶值转移的实验研究方法按美国西北脂类研究实验室（NWLRL）制定的测试步骤进行，用WHO-IFCC的国际标准靶值转移和靶值转移后的测试系统准确性和精密度的评估等三个步骤进行。结果 第一步骤测试系统评估符合要求，第二步骤的结果均≤2%期望值，第三步骤ApoAⅠ、ApoB偏差值≤1.8，CV≤0.9%。结论 国产北加ApoAⅠ、ApoB参考品的定值与WHO-IFCC国际标准品靶值转移成功，获得NWLRL的WHO-IFCC ApoAⅠ、ApoB国际标准靶值转移合格证书。 关键词：载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）、载脂蛋白B（ApoB）参考品。 载脂蛋白ApoAⅠ、ApoB免疫透射比浊法试剂盒，最近完成了医疗器械注册，并获得国家食品药品监督总局颁发的注册文号。但一直困绕着我们一大问题是参考品的定值。为了制备有溯源性的参考品我们与美国华盛顿大学西北脂类研究实验室（NWLRL）联系，申请参加ApoAⅠ、ApoB参考品靶值转移方案。通过NWLRL靶值转移工作三个步骤评估,已获得WHO载脂蛋白AⅠ、B（ApoAⅠ、ApoB）国际标准靶值转移合格证书。现将实验研究报告如下： 材料与方法 1 材料与方法 1.1 仪器 1.1.1 HITACHI 7060-C自动生化分析仪 1.1.2. 实验参数(免疫透射比浊法终点法) 温度37℃，波长 700nm（副）/340nm（主） 1cm光径，样品3ul，R1 250ul，R2 50ul，分析点16点-31点。 1.2 试剂 羊抗人抗血清：本公司自制，ApoAⅠ效价≥1:32，ApoB效价≥512。 试剂1(R1)： 0.01mmol/L磷酸盐缓冲液加入聚乙二醇-6000。 试剂2(R2)： 磷酸盐缓冲液、抗体液。 1.3 ApoAⅠ、ApoB参考品：批号 北 取新鲜人血清，剔除脂血、溶血、黄疸血清，经测HBsAg阴性，混合后加入适量 防腐剂混匀分装，-70℃保存。 作者简介：陈铭生，男，1942年生，主任检验师，主要从事临床化学。 1.4 WHO国际参考材料 1.4.1 Sp1-01 ApoAⅠ定值1.50±0.08g/L、Sp3-07 ApoB定值1.22±0.02g/L， 冻干品,使用时25℃加去离子水（1.000±0.005ml）复溶。 这两种参考血清由美国华盛顿大学NWLRL研制，经世界卫生组织（WHO）认可，定名为“WHO-IFCC国际参考品”[2-4]。 1.4.2 定值质控血清三种 白 12 、绿 12 、兰 12 。 测定前未告知定值，冷冻品，使用前1小时融化，混匀。 1.4.3 新鲜人血清样本40人份。 2 实验与结果 NWLRL关于ApoAⅠ、ApoB靶值转移工作要分三个步骤进行。 2.1 第一步骤 2.1.1 用WHO-IFCC国际参考品评估我们实验分析系统。 2.1.2 方法 根据NWLRL规定，用我们的试剂、仪器及实验分析参数，用Sp1-01与Sp3-07的定值为标准。每次均作标准曲线，分别测定我们尚未知值的白12、绿12、兰12三种定值质控血清的ApoAⅠ、ApoB的值。每天测定二批，每批重复测四次，连续测定三天，将结果按要求填表寄回给NWLRL。 2.1.3 结果 用Sp1-01与Sp3-07靶值定标 表1 白12、绿12、兰12 ApoAⅠ、ApoB测试结果（g/L） NWLRL定值 测定均值 SD CV% 偏差% A1 B A1 B A1 B A1 B A1 B 白12 106 70 107 70 3.1 1.5 2.9 2.1 1.1 -0.4 绿12 172 147 171 150 2.7 1.8 1.6 1.2 -0.4 2.3 兰12 137 96 135 97