《普通生物学实验课》 显微镜基本知识介绍2.ppt

普通光学显微镜的认识及其使用 掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。 了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维护方法 （列入实验习惯成绩测评） 一 .光学显微镜的发展 古代显微镜历史上的两个重要人物 Leeuwenhoek (1632-1723） 设计出了几百种功能较简单的显微镜 放大倍数取决于透镜质量可以从70 ×-250 × 分辨率可以达到1μm 绘制出原生动物、细菌和红细胞 Robert Hooke （1635-1703） 使用复式显微镜 第一次提出细胞概念 绘制了许多精美的显微图像  1827年阿米奇第一个采用了浸液物镜。高质量消色差浸液物镜的出现，使显微镜观察微细结构的能力大为提高。 19世纪70年代，德国人阿贝（Ernst Abbe）奠定了显微镜成像的古典理论基础。 在显微镜本身结构发展的同时，显微观察技术也在不断创新. 至20世纪上半叶，显微镜就有了明视野、暗视野、相位差、微分干涉、荧光、偏光体视、倒置等类型。 显微镜的基本结构 物镜 目镜 粗细准焦螺旋 载物台 玻片夹 聚光器 光源 光学放大系统 聚光照明系统 机械系统 物镜转换器 光标摇杆（样品的指示作用） 光路拉杆 （显微观察时，将光路拉杆拉开，图像就会传到多媒体电脑中，投影在屏幕上，便于教师观察讲解） 白平衡调节键 目镜放大倍数：10 × 物镜放大倍数： 4 × 低倍观察（红色） 10 × 低倍观察（黄色） 20 × 高倍观察（绿色） 40 × 高倍观察（蓝色） 100 × 油镜观察 （白色） 数值孔径 在物镜上有(N.A.)数值孔径的标志,它反应该镜头分辨力的大小,其数字越大,表示分辨率越高。 最大分辨率：肉眼 0.2 mm;光镜 0.2 μm;电镜 0.2 nm 显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放大倍率的乘积。放大倍率是指直线尺寸的放大比，而不是面积比。 因此普通光学显微镜的最大有效倍数为10X100 聚光镜 聚光镜升降旋钮 孔径光阑 视场光阑 孔径光阑的作用是使图像的分辨率、反差和焦深处在最佳状况。通常是用物镜的数值孔径来调节聚光镜的孔径光阑。 视场光阑是根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积，在显微摄影时，起着增减影像反差的作用。 孔径光栏调节 N.A聚=(0.6-0.8)N.A物 孔径光阑的位置是在物镜数值孔径的60%-80%之间。 100% 70% 30% 孔径光阑与显微镜分辨率 视野很亮，杂散光和炫光很多，对比度差，一些细节丢失 调到物镜数值孔径的2/3 至4/5时，显微镜的分辨率和反差获得最佳的配合，对比度好细节较丰富 远小于物镜数值孔径时，视野暗，成像细节不清晰。 对染色浅、对比度低的标本进行观察和显微照相时，最好把孔径光阑关得再小一些；而对于那些染色深、对比度高的标本进行观察和显微照相时，则将孔径光阑开得再大一些为好。 孔 径 光 栏 的 运 用 显微镜的使用 1. 观察前的准备工作 显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常,并对载物台、目镜、物镜以及聚光器透镜进行必要的清洁工作。然后进行显微镜调节。 擦拭方向和部位 目镜表面 物镜表面 聚光镜表面 底座光源出口 目镜筒内侧 擦拭方向 擦拭部位 警 示 ! 塑料表面勿用酒精乙醚混合液 镜片表面禁用干镜头纸擦拭 物镜不可随意拆卸且防震防摔 2. 显微镜的调节 (1)瞳距调节 水平移动 旋转移动 观察时双眼要同时睁开，使双眼看到的图像重合为一个图像。 (2)屈光度调节 3. 观察操作步骤： 1)放置标本 降低载物台，把所要观察的标本放到载物台上,用玻片夹固定平稳。 旋转载物台右侧下方的旋杆，左右，前后平移，将要观察的样品移至光路中，使标本正对通光孔。 注意事项：装入玻片时,要将玻片平行推入载物台样品夹,勿将玻片塞在样品夹下。 2）焦点调节 升高聚光镜至合适的位置。（注意：不要顶到玻片） 旋转物镜转换器，将10倍物镜旋至光路中。 调节粗准焦螺旋，将载物台升至最高，缓缓下降进行调焦，直到看清物像为止。 再调节细准焦螺旋，将物像调制清晰。 调节聚光镜上的数值孔径光栏，增加反差，使图像更清晰。 3）使用高倍镜观察 将需要观察的部分移到视野的中央，顺时针转换成高倍 物镜。眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调节钮，直至视野内看到清晰的物像为止。 4）使用油镜观察 将观察对象移到视野中央，移开40倍物镜，将镜油滴在标本的盖玻片上，直接换入油镜，使镜头沁入油中。转动细准焦螺旋，调整焦点，使物像清晰。 注意事项：使用油镜后,用清洗液清洁镜头。严禁用擦镜纸干擦,以免损伤镜头。 4.使用后清理工作： 使用完毕,取走样品放回原处,低倍镜对