冷冻损伤对鼠胚发育影响及的形成细胞数.pdfVIP

冷冻损伤对鼠胚发育的影晌及形成细胞数 硕士研究生： 张艳 嚣导教努：邵小竞 教援 指导小组： 熊曙康教授 王磊副教授 专业名称：妇产辩学 摘 要 vitro 背景：在体外受精(in injection，ICSI)治疗时，取出的卵经受糕后 (intracytoplasmicsperm 除当月周期胚胎移植外，还有剩余胚胎，如梅这部分胚胎冷冻储存待 以后需要时咫，可以提窝一次取卵瓣总妊娠率，节约惑者的费耀。因 此随着辅渤生育技术(assisted technology，ART)的进步， reproductive 籁胎冷冻技术已经成为其发展不可分割的一部分。但是较新鲜胚胎移 植而言冻融胚胎的妊娠率仍较低Ⅲ，尽管冷冻过程中产生的冷冻损伤对 冻融胚胎的存活率和妊娠率的影响已经成为共识，但具体原因仍在研 究中。有学者认为冷冻胚胎存在个体差异，发育潜能离的胚胎耐受冷 冻过程，勰冻蜃存活率、妊娠率不受影8怠，发鸯潜能低的_|l丕胎则相反， 解冻后存活率、妊娠率大大降低；还有学者认为冷冻攒伤和冷冻技术 无关，雨是和冷冻过程本身有关，只要冷冻过程中产生冰晶即冷冻损 伤，胚胎的存活率和种植率就会受到影响。 目的：通过鼠胚模拟人类胚胎冷冻过程，以研究冷冻损伤对胚胎 发育的影响。首先对比4细胞胚和8细胞胚在冷冻过程中损伤细胞数， 分橱冷冻损伤程度对胚胎继续发育能力憨影响，然恁比较毅鲜鼠胚秘 冷冻鼠胚(包括无冷冻损伤和≤50％冷冻损伤)解冻后发育至囊胚的能 力及形成扩张囊胚细施数是否存在差异，进一步研究冷冻损伤辱致胚 胎发育潜能低下的原因。 方法：于hCG注射后60小时收集的4细胞鼠胚为组l，68小时 收集的8细胞鼠胚为组2，挑选组l和组2的II级及其以上的鼠胚随机 分为实验组和对照组，实验组为将收集到的4细胞胚或8细胞胚进行 冷冻处理，解冻后按冷冻损伤程度分为无冷冻损伤缝(缱a)和≤50％ 冷冻损伤组(缝b)，继续培养40小时载32小时至囊憝：对照缎为收 集习酶4缀腿坯藏8纲戆疆壹接培养霹0小时或32小时至囊骚。实验 组和对照组收集到的囊胚继续培养4小时后至扩张囊胚期，阂窳染色 计数最后形成的细胞数。 结果：1．解冻腊丢失1个卵裂球的胚胎继续发育能力低于未蛰失 细胞的胚胎，但无盟著性差异；丢失2个卵裂球的胚胎与未丢失细胞 胚胎相比，卵裂期停滞牵高、囊胚期发育率低，差异有显著性(PO．05)， 尤其是4细胞殛齄。8细胞胚骀解冻恁丢失缨德酶殛验囊胚麓发窝能力 离子4细旎惩胎，毽无显著注差吴尹0。05。 2．无冷冻损伤胚胎有49．3％发育到囊脎期，20．90／0发育到桑椹腥期， 卵裂期停滞率为29．9％，均与对照组即继续培养的新鲜胚胎接近； ≤50％冷冻损伤组的胚胎因冷冻损伤的影响，卵裂期停滞率高于无 冷冻损伤组，囊胚期发育率低于无冷冻损伤组(PO．05)。 3．解冻后无冷冻损伤坯骀发育至扩张囊胚期的平均细胞数为 52圭ll，l曩＼，毫予≤50％冷冻损揍殛骀发蠢至扩张囊珏期豹鼍王均纲戆数 43士8，7个(PO．05)，与对照缰未行冷凉楚瑾的坯骀发弯至扩张囊胚 扩张囊胚期的细胞数无差别(PO．05)。 结论：l、_|j丕胎冷冻过程中只要有冷冻损伤，继续发育能力就会下 降，下降程度和冷冻前4细胞胚或8细胞胚数无关，和解冻后卵裂球 损伤程度成正比。 2、冷冻过程中来发生冷冻摄线殛髓戆继续发育能力鞠毅鲜 胚精无差异，离予≤50％冷冻损伤胚舱。 3、冷冻损伤便解冻后胚胎继续发商能力受损，最终结果怒 形成的扩张囊胚细胞数减少，可能是冻融胚胎种植力低下的主鼹原因。 关键词：胚胎冷冻冷冻损伤 囊胚期平均细胞数 The tothefurther andcell cryodamage growth numbersinmicefrozen—thawed embryos