唑来磷酸增加肺癌细胞化疗敏感性的体外实验探究.pdf

·中文论著摘要· 唑来膦酸增加肺癌细胞化疗敏感性的体外实验研究 研究背景 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤，大约30-40％的非小细胞肺癌就诊时已经存 在多发转移，预后极差。尽管现在的治疗手段不断发展，5年生存率仍不足15％。 化疗是目前晚期肺癌常用的治疗手段，目前常用的化疗方案一般联用铂类和第三 代化疗药物，如紫杉类、吉西他滨、长春瑞滨、依立替康等。研究表明，上述化 疗方案尽管作用机制不同，但在治疗效果方面差异没有统计学意义，各种方案的 药物反应率均不足40％，这足以说明，目前肺癌的化疗疗效已经进入了平台期， 如何提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，已经成为近年来研究的热点问题。 唑来膦酸是第3代含氮的杂环双膦酸盐药物，是第一个也是唯一被证实对多种 实体肿瘤引起的骨转移有效的药物，与前2代双膦酸盐相比，起效更快、缓解率更 高、持续时间更长。临床前研究提示唑来膦酸除了对骨吸收有抑制作用外，还具 有直接的体内外抗肿瘤作用，且与标准抗癌药物／COX-2抑制剂联用具有协同作 用。为此我们进行了唑来膦酸对肺癌细胞株A549是否有生长抑制及诱导凋亡作用， 并观察其与吉西他滨联用是否有协同作用的体外实验。本研究旨在探讨唑来膦酸 在体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549的生长抑制及诱导凋亡的作用，进一 步研究唑来膦酸与细胞毒性药物吉西他滨对A549细胞是否具有协同作用。 方法 应用MTT法测定不同剂量的唑来膦酸、吉西他滨及二药联合对A549的生长抑 制率，选择IC20及IC50的唑来膦酸浓度为适宜浓度，实验分组为：空白对照组，Z (唑来膦酸+吉西他滨)，采用流式细胞术检测不同分组的细胞周期、细胞凋亡率。 用透射电子显微镜观察不同分组细胞形态学改变。 结-·1：i 木果 l、唑来膦酸对肺癌A549细胞系有增殖抑制作用 O．1．200umol／L的唑来膦酸对A549细胞有明显的生长抑制作用，且呈时间依赖 性及剂量依赖性效应，ZOL浓度从0．1panol／LE升蛰J200rtmol／L时，随着ZOL浓度的 升高，细胞存活率明显降低，有剂量效应关系。并且随着作用时间的延长，对A549 细胞抑制率增加，表明唑来膦酸对肺癌细胞抑制作用有时间依赖性。 2、吉西他滨对肺癌A549细胞系生长的抑制作用 0．0001．10“咖L的吉西他滨对A549细胞均有抑制作用，且随着药物浓度的增 加及作用时间的延长，抑制作用明显增强，吉西他滨对A549细胞72h的 IC20：0．002}tg／ml。 3、Z组，G组，及G+Z组对A549细胞系的细胞周期影响 唑来膦酸作用72h后，G0／G1期(DNA合成前期)的细胞百分比明显高于空白对 胞百分比高于空白对照组(P0．05)，将肿瘤细胞阻滞在S期，减少进入G2、M期的细 胞数目。联合组：随着药物浓度的增加，G0／G1期比例略下降，S期比例增大，G2／M 期比例下降明显，表现为S期阻滞。 4、Z组，G组，及G吧组对A549细胞凋亡率的影响 凋亡率分别为16．94％、30．1％，ZOL与吉西他滨联用作用72h后，细胞凋亡率较唑来磷 胞凋亡率分别为39．7％、42．9％和52．O％。 5、透射电子显微镜观察到细胞形态改变 从透射电子显微镜摄片观察各组细胞超微结构：唑来膦酸组细胞呈现凋亡早 期形态学改变，细胞体积缩小，染色质边聚，核膜成新月状；吉西他滨组细胞体 积增大，可见异染色质凝聚；联合组细胞肿胀，异染色质高度边集，呈半月形， 核着边，呈现明显凋亡中期改变。 2 -，己 当口结论 1、唑来膦酸单独作用对肺癌细胞系A549具有明显抑制增殖及诱导凋亡作用， 呈剂量、时间依赖性。 2、唑来膦酸与吉西他滨联用能协同抑制肺癌细胞系A549的增殖及诱导凋亡。 3、唑来膦酸作用于肺癌细胞系A549可以干扰其DNA合成，其作用机制是通过 诱导细胞凋亡来实现的。 关键词 唑来膦酸；吉西他滨；肺癌A549细胞；细胞凋亡；细胞周期