唑来膦酸联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589体外协同抗多发性骨髓瘤作用机制的探究.pdfVIP

中文摘要 唑来膦酸与组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589体外协同抗多发 性骨髓瘤作用机制的研究 摘 要 目的：多发性骨髓瘤(multiple 性增殖性恶性血液病疾病，在我国的发病率约为1／100000，但随着人口 老龄化的增加，MM的发病率也有逐年增高的趋势。尽管近年来大剂量化 疗以及新药沙利度胺、雷那度胺及硼替佐米的应用在临床治疗中己取得 了较好的疗效，但多发性骨髓瘤仍然存在耐药及复发，因此还需要进一步 研发新的药物。唑来膦酸是第三代二磷酸盐药物，己在国内外应用于 MM骨病治疗及预防，有研究发现，唑来膦酸能够通过抑制骨髓瘤细胞 中焦磷酸法尼酯合成酶，进而阻止小G蛋白异戊烯化引而起骨髓瘤细胞 凋亡。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)通过抑制组蛋白去乙酰化酶 (皿AC)的活性，诱导靶细胞中组蛋白高度乙酰化，启动某些特异性 基因的表达，从而阻断肿瘤细胞的生长。LBH．589是氧肟酸盐类 HDACi，在实体瘤和血液系统肿瘤的临床前试验中均显示了抗肿瘤活 受体复合物最重要的部分，IL．6在MM细胞生长以及存活中扮演着重要 角色，下调CDl30的表达能够影响对MM细胞生长促进作用。本实验 探索了唑来膦酸联合LBH589对人骨髓瘤细胞株KM3细胞的协同抗肿 瘤作用及对表面标志CDl30的影响，为今后这两种药物联合应用于临床 试验提供了理论基础和证据。 方法： l细胞培养人多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞，用含10％灭活胎牛血 50mL／L C02的培养箱中培养。实验时细胞处于对数生长期，台盼蓝染色 拒染率95％以上。 5、20nmol／L)的 0．5、1lanol／L)的唑来膦酸、不同浓度(5、10、1 中文摘要 KM3细胞增殖的影响。 3细胞凋亡检测不同浓度(O．01、O．05、0．1 gmol／L)唑来膦酸、 应用流式细胞仪测定细胞凋亡率。 4细胞周期检测：．上述浓度的唑来膦酸、LBH589及两药联合处理 KM3细胞48h后，应用流式细胞仪测定细胞周期。 5 处理KM3细胞48h后，应用流式细胞仪进行表面标志检测。 结果： 1 nmol／L不同浓 O．1、O．5、llamol／L浓度的唑来膦酸单药，5、lO、15、20 联合处理24h、48 h、72h后，各组细胞抑制率不同程度增大，且随着药 物浓度增加及作用时间延长，抑制率逐渐增大，差异有显著性(尸 O．05)。将同一处理组不同时间两两比较，差异有统计学意义(P O．05)，同一时间不同浓度处理组两两比较，差异有统计学意义(尸 均呈剂量依赖性及时间依赖性。唑来膦酸与LBH589各浓度两两联合用药 时的CI均小于0．9，表明两药对KM3细胞有协同抑制作用，协同作用最强 组为唑来膦酸0．1 5nmol／L。 lirnol／L联合LBH589 2流式细胞术检测KM3细胞凋亡：依据MTT结果调整唑来膦酸与 联合用药组均在GO／G1峰前出现了亚二倍体细胞峰，表明各组均出现了 凋亡，唑来膦酸联合LBH589与两药单独应用相比增加了KM3细胞凋 亡，差异有统计学意义(尸O．05)。 3流式细胞术检测KM3细胞周期：KM3细胞经过上述不同浓度的唑 来膦酸、LBH589及两药联合作用48h后，(1)唑来膦酸单药组，随着唑 来膦酸作用浓度增加，S期细胞比例升高，G0／G1期细胞比例降低，其中 中叉捅要 显，(3)联合用药组，随着两药作用浓度增加，G2／M期细胞比例降低， 5、10nmol／L两两联合组与对照 其中唑来膦酸O．05、O．19mol／L和LBH589 组相比，差异有统计学意义(PO．0